CAJ | 학술논문

目的:观察程序性细胞死亡蛋白5(programmed cell death 5,PDCD5)在米非司酮(mifepristone,MIF)诱导的前列腺癌细胞凋亡中的作用,并探讨其机制.方法:MTT法检测不同浓度(5、10、20、50、100 μmol/L)的MIF作用前列腺癌PC-3M细胞24～96 h后的吸光度(D)值,找到最佳作用时间及浓度.将真核表达载体PCI-neo-PDCD5用脂质体介导的方法转染入PC-3M细胞后,采用细胞免疫荧光法检测PDCD5蛋白的表达水平.在转染PDCD5基因的细胞中加入最佳作用浓度的MIF,继续培养24、48 h后,采用TUNEL和吖啶橙(acrine orange,AO)/溴化乙锭(ethidium bromide,EB)法检测细胞凋亡情况,Western印迹法检测凋亡相关蛋白caspase-3的表达变化.结果:MTT检测结果显示,与对照组相比,5、10 μmol/L MIF组的D值没有显著变化(P>0.05),20、50和100 μmol/L MIF组的D值显著降低(P<0.05),说明MIF对前列腺癌PC-3M细胞的抑制作用呈时间和剂量依赖性.PDCD5基因真核表达载体成功转染入PC-3M细胞,并得到高表达.TUNEL和AO/EB检测结果显示,与对照组及单独应用MIF组相比,转染PDCD5基因并加入MIF后的细胞凋亡率显著增加(P<0.01);Western印迹结果显示,caspase-3蛋白在PDCD5与MIF联合作用时的表达明显增加(P<0.01).结论:外源性PDCD5在MIF诱导的前列腺癌细胞凋亡中有明显的正协同作用,推测其有望成为前列腺癌临床治疗的一个辅助药物.
목적:관찰정서성세포사망단백5(programmed cell death 5,PDCD5)재미비사동(mifepristone,MIF)유도적전렬선암세포조망중적작용,병탐토기궤제.방법:MTT법검측불동농도(5、10、20、50、100 μmol/L)적MIF작용전렬선암PC-3M세포24～96 h후적흡광도(D)치,조도최가작용시간급농도.장진핵표체재체PCI-neo-PDCD5용지질체개도적방법전염입PC-3M세포후,채용세포면역형광법검측PDCD5단백적표체수평.재전염PDCD5기인적세포중가입최가작용농도적MIF,계속배양24、48 h후,채용TUNEL화아정등(acrine orange,AO)/추화을정(ethidium bromide,EB)법검측세포조망정황,Western인적법검측조망상관단백caspase-3적표체변화.결과:MTT검측결과현시,여대조조상비,5、10 μmol/L MIF조적D치몰유현저변화(P>0.05),20、50화100 μmol/L MIF조적D치현저강저(P<0.05),설명MIF대전렬선암PC-3M세포적억제작용정시간화제량의뢰성.PDCD5기인진핵표체재체성공전염입PC-3M세포,병득도고표체.TUNEL화AO/EB검측결과현시,여대조조급단독응용MIF조상비,전염PDCD5기인병가입MIF후적세포조망솔현저증가(P<0.01);Western인적결과현시,caspase-3단백재PDCD5여MIF연합작용시적표체명현증가(P<0.01).결론:외원성PDCD5재MIF유도적전렬선암세포조망중유명현적정협동작용,추측기유망성위전렬선암림상치료적일개보조약물.