CAJ | 학술논문

目的构建免疫球蛋白结合分子金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)和链球菌蛋白G(SPG)单结构域随机组合噬菌体展示文库,为研究其分子功能与结构的关系奠定基础.方法 PCR扩增制备SPA的A、B、C 、D、 E结构域和SPG的B2结构域核苷酸片段,在片段两端通过引物引入XbaⅠ酶切位点和保护碱基,3′端引入3个氨基酸大小的随机连接肽核苷酸序列,各结构域核苷酸片段经XbaⅠ酶消化,在T4连接酶作用下随机相互连接并克隆于噬菌体展示载体pCANTAB5S,克隆产物转化E.coli DH5α,提取原代库质粒转化E.coli TG1,经M13K07辅助噬菌体拯救,构建成SPA和SPG单结构域随机组合噬菌体展示文库.结果该噬菌体展示文库库容量为1.87×107 cfu,滴度为1.3×1014 TU/ml,文库的片段插入率近100%,其中插入多个结构域的阳性克隆占21.7%,序列分析显示各结构域之间的连接和随机连接肽序列具有随机性.结论成功地构建了SPA和SPG单结构域随机组合噬菌体展示文库,该文库在库容量、多样性和随机性方面满足体外分子进化研究的要求.
목적 구건면역구단백결합분자금황색포도구균단백A(SPA)화련구균단백G(SPG)단결구역수궤조합서균체전시문고,위연구기분자공능여결구적관계전정기출.방법 PCR확증제비SPA적A、B、C 、D、 E결구역화SPG적B2결구역핵감산편단,재편단량단통과인물인입XbaⅠ매절위점화보호감기,3′단인입3개안기산대소적수궤련접태핵감산서렬,각결구역핵감산편단경XbaⅠ매소화,재T4련접매작용하수궤상호련접병극륭우서균체전시재체pCANTAB5S,극륭산물전화E.coli DH5α,제취원대고질립전화E.coli TG1,경M13K07보조서균체증구,구건성SPA화SPG단결구역수궤조합서균체전시문고.결과 해서균체전시문고고용량위1.87×107 cfu,적도위1.3×1014 TU/ml,문고적편단삽입솔근100%,기중삽입다개결구역적양성극륭점21.7%,서렬분석현시각결구역지간적련접화수궤련접태서렬구유수궤성.결론 성공지구건료SPA화SPG단결구역수궤조합서균체전시문고,해문고재고용량、다양성화수궤성방면만족체외분자진화연구적요구.