山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2011年
4期
37-39
,共3页
黄大林%袁桂峰%王鑫%李彬彬%钟江
黃大林%袁桂峰%王鑫%李彬彬%鐘江
황대림%원계봉%왕흠%리빈빈%종강
白细胞介素2%杆状病毒科%载体%质粒%小鼠
白細胞介素2%桿狀病毒科%載體%質粒%小鼠
백세포개소2%간상병독과%재체%질립%소서
目的 构建携带鼠IL-2基因的重组杆状病毒表达载体.方法 将目的 基因鼠IL-2克隆入杆状病毒表达载体pFastBacDual中,构建重组质粒pFB-CMV-IL-2并予酶切和PCR鉴定;将pFB-CMV-IL-2转化到含杆状病毒穿梭载体Bacmid的DH10Bac感受态菌中,筛选阳性克隆,获得重组杆状病毒载体Bacmid-pFB-CMV-IL-2,抽提质粒;用脂质体转染法将Bacmid-pFB-CMV-IL-2转染Sf9昆虫细胞包装病毒;收获完整重组杆状病毒,反复感染Sf9细胞扩增病毒,提取杆状病毒基因组,用PCR验证重组杆状病毒的正确性.结果 成功构建鼠IL-2基因杆状病毒表达载体.结论 本试验为进一步在哺乳细胞中表达鼠IL-2基因、开发研究IL-2奠定了基础,同时亦为其他蛋白质的真核细胞表达提供了方法参考.
目的 構建攜帶鼠IL-2基因的重組桿狀病毒錶達載體.方法 將目的 基因鼠IL-2剋隆入桿狀病毒錶達載體pFastBacDual中,構建重組質粒pFB-CMV-IL-2併予酶切和PCR鑒定;將pFB-CMV-IL-2轉化到含桿狀病毒穿梭載體Bacmid的DH10Bac感受態菌中,篩選暘性剋隆,穫得重組桿狀病毒載體Bacmid-pFB-CMV-IL-2,抽提質粒;用脂質體轉染法將Bacmid-pFB-CMV-IL-2轉染Sf9昆蟲細胞包裝病毒;收穫完整重組桿狀病毒,反複感染Sf9細胞擴增病毒,提取桿狀病毒基因組,用PCR驗證重組桿狀病毒的正確性.結果 成功構建鼠IL-2基因桿狀病毒錶達載體.結論 本試驗為進一步在哺乳細胞中錶達鼠IL-2基因、開髮研究IL-2奠定瞭基礎,同時亦為其他蛋白質的真覈細胞錶達提供瞭方法參攷.
목적 구건휴대서IL-2기인적중조간상병독표체재체.방법 장목적 기인서IL-2극륭입간상병독표체재체pFastBacDual중,구건중조질립pFB-CMV-IL-2병여매절화PCR감정;장pFB-CMV-IL-2전화도함간상병독천사재체Bacmid적DH10Bac감수태균중,사선양성극륭,획득중조간상병독재체Bacmid-pFB-CMV-IL-2,추제질립;용지질체전염법장Bacmid-pFB-CMV-IL-2전염Sf9곤충세포포장병독;수획완정중조간상병독,반복감염Sf9세포확증병독,제취간상병독기인조,용PCR험증중조간상병독적정학성.결과 성공구건서IL-2기인간상병독표체재체.결론 본시험위진일보재포유세포중표체서IL-2기인、개발연구IL-2전정료기출,동시역위기타단백질적진핵세포표체제공료방법삼고.
