中国海洋大学学报（自然科学版）
中國海洋大學學報（自然科學版）
중국해양대학학보（자연과학판）
PERIODICAL OF OCEAN UNIVERSITY OF CHINA
2011年
5期
59-62,70
,共5页
衣俊杰%臧晓南%张学成%袁定阳%赵炳然%唐俐
衣俊傑%臧曉南%張學成%袁定暘%趙炳然%唐俐
의준걸%장효남%장학성%원정양%조병연%당리
节旋藻%藻蓝蛋白α亚基基因%裂合酶基因%重组%大肠杆菌
節鏇藻%藻藍蛋白α亞基基因%裂閤酶基因%重組%大腸桿菌
절선조%조람단백α아기기인%렬합매기인%중조%대장간균
为探索节旋藻藻蓝蛋白的生物合成机理,以钝顶节旋藻(Arthrospira platensisFACHB314)基因组DNA为模板克隆了藻蓝蛋白α亚基基因cpcA、催化脱辅基蛋白与色基结合的裂合酶基因cpcE和cpcF,以及催化色基合成的铁氧蛋白氧化还原酶基因pcyA;以Synechocystis sp.PCC6803基因组DNA为模板克隆了亚铁血红素氧化酶基因hox1.然后分别将cpcA、cpcE和cpcF基因构建到质粒pACYCDuet-1中,将hox1和pcyA基因构建到质粒pET-24a(+)中,用电击法将二者共司转化E.coli BL21(DE3),经诱导表达得到具有荧光活性的节旋藻藻蓝蛋白α亚基.在590 nm激发波长下,荧光发射峰为637.8nm,证实了节旋藻自身的裂合酶cpcE和cpcF能够催化色基PCB与藻蓝蛋白脱辅基结合产生有荧光活性的藻蓝蛋白α亚基,为表达有荧光活性的藻蓝蛋白提供理论和实验基础.
為探索節鏇藻藻藍蛋白的生物閤成機理,以鈍頂節鏇藻(Arthrospira platensisFACHB314)基因組DNA為模闆剋隆瞭藻藍蛋白α亞基基因cpcA、催化脫輔基蛋白與色基結閤的裂閤酶基因cpcE和cpcF,以及催化色基閤成的鐵氧蛋白氧化還原酶基因pcyA;以Synechocystis sp.PCC6803基因組DNA為模闆剋隆瞭亞鐵血紅素氧化酶基因hox1.然後分彆將cpcA、cpcE和cpcF基因構建到質粒pACYCDuet-1中,將hox1和pcyA基因構建到質粒pET-24a(+)中,用電擊法將二者共司轉化E.coli BL21(DE3),經誘導錶達得到具有熒光活性的節鏇藻藻藍蛋白α亞基.在590 nm激髮波長下,熒光髮射峰為637.8nm,證實瞭節鏇藻自身的裂閤酶cpcE和cpcF能夠催化色基PCB與藻藍蛋白脫輔基結閤產生有熒光活性的藻藍蛋白α亞基,為錶達有熒光活性的藻藍蛋白提供理論和實驗基礎.
위탐색절선조조람단백적생물합성궤리,이둔정절선조(Arthrospira platensisFACHB314)기인조DNA위모판극륭료조람단백α아기기인cpcA、최화탈보기단백여색기결합적렬합매기인cpcE화cpcF,이급최화색기합성적철양단백양화환원매기인pcyA;이Synechocystis sp.PCC6803기인조DNA위모판극륭료아철혈홍소양화매기인hox1.연후분별장cpcA、cpcE화cpcF기인구건도질립pACYCDuet-1중,장hox1화pcyA기인구건도질립pET-24a(+)중,용전격법장이자공사전화E.coli BL21(DE3),경유도표체득도구유형광활성적절선조조람단백α아기.재590 nm격발파장하,형광발사봉위637.8nm,증실료절선조자신적렬합매cpcE화cpcF능구최화색기PCB여조람단백탈보기결합산생유형광활성적조람단백α아기,위표체유형광활성적조람단백제공이론화실험기출.
