生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
4期
181-185
,共5页
陈英%朱绮霞%张搏%陈东%黄日波
陳英%硃綺霞%張搏%陳東%黃日波
진영%주기하%장박%진동%황일파
黏质沙雷氏菌%脂肪酶%易错PCR%定向进化
黏質沙雷氏菌%脂肪酶%易錯PCR%定嚮進化
점질사뢰씨균%지방매%역착PCR%정향진화
利用易错PCR技术对黏质沙雷氏菌脂肪酶基因LipA进行定向进化,经过筛选最终获得一个比活力比野生酶提高了425 U/mg的突变体ep1,测序分析ep1有5个氨基酸发生了突变,与野生酶相比ep1的最适pH值由原来的8.5降低为7.5,Tm值提高3℃,Km值由原来的40 mg/mL降低为12.5 mg/mL.对其三维结构进行分析,推测酶学性质的改变可能与处在活性中心右前方双螺旋发卡结构上的158A、和处在下部β卷曲折叠拐角处的S375G的突变有关.
利用易錯PCR技術對黏質沙雷氏菌脂肪酶基因LipA進行定嚮進化,經過篩選最終穫得一箇比活力比野生酶提高瞭425 U/mg的突變體ep1,測序分析ep1有5箇氨基痠髮生瞭突變,與野生酶相比ep1的最適pH值由原來的8.5降低為7.5,Tm值提高3℃,Km值由原來的40 mg/mL降低為12.5 mg/mL.對其三維結構進行分析,推測酶學性質的改變可能與處在活性中心右前方雙螺鏇髮卡結構上的158A、和處在下部β捲麯摺疊枴角處的S375G的突變有關.
이용역착PCR기술대점질사뢰씨균지방매기인LipA진행정향진화,경과사선최종획득일개비활력비야생매제고료425 U/mg적돌변체ep1,측서분석ep1유5개안기산발생료돌변,여야생매상비ep1적최괄pH치유원래적8.5강저위7.5,Tm치제고3℃,Km치유원래적40 mg/mL강저위12.5 mg/mL.대기삼유결구진행분석,추측매학성질적개변가능여처재활성중심우전방쌍라선발잡결구상적158A、화처재하부β권곡절첩괴각처적S375G적돌변유관.
