沈阳农业大学学报
瀋暘農業大學學報
침양농업대학학보
JOURNAL OF SHENYANG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2011年
4期
422-427
,共6页
葡萄%白藜芦醇合酶%基因克隆%序列分析%原核表达
葡萄%白藜蘆醇閤酶%基因剋隆%序列分析%原覈錶達
포도%백려호순합매%기인극륭%서렬분석%원핵표체
从贝达葡萄中提取总RNA,采用RT-PCR方法,克隆到了白藜芦醇合酶(resveratrol synthase,RS)基因的全长cDNA.将其与圆叶葡萄(Vitis rotundifolia)、华东葡萄(Vitis pseudoreticulata)、河南毛葡萄(Vitis ficifolia)、河岸葡萄(Vitis vulpine)、酿酒葡萄(Vitis virufera)、羊蹄甲(Bauhinia)、花生(Arachis hvpogaea)、虎杖(Polygonum cuspiaatum)、大黄(Rheum officinale)进行氨基酸同源性比对,结果表明:分离的RS基因与其他葡萄的RS基因编码的氨基酸同源性达到97％以上,与其他属的RS基因编码的氨基酸同源性达到64％以上.生物信息学分析表明,该蛋白分子量为43kD,等电点pI=6.2,包含392个氨基酸残基.将RS的全长cDNA插入到表达载体pET28a中构建重组表达质粒pET28a-RS,转化大肠杆菌BL21,SDS-PAGE电泳检测结果表明,以30C、0.5mmol·L--1PTG诱导4h时该基因表达效果最好,诱导产物为1个约43kD的蛋白,为进一步纯化和鉴定目的蛋白提供了基础.
從貝達葡萄中提取總RNA,採用RT-PCR方法,剋隆到瞭白藜蘆醇閤酶(resveratrol synthase,RS)基因的全長cDNA.將其與圓葉葡萄(Vitis rotundifolia)、華東葡萄(Vitis pseudoreticulata)、河南毛葡萄(Vitis ficifolia)、河岸葡萄(Vitis vulpine)、釀酒葡萄(Vitis virufera)、羊蹄甲(Bauhinia)、花生(Arachis hvpogaea)、虎杖(Polygonum cuspiaatum)、大黃(Rheum officinale)進行氨基痠同源性比對,結果錶明:分離的RS基因與其他葡萄的RS基因編碼的氨基痠同源性達到97％以上,與其他屬的RS基因編碼的氨基痠同源性達到64％以上.生物信息學分析錶明,該蛋白分子量為43kD,等電點pI=6.2,包含392箇氨基痠殘基.將RS的全長cDNA插入到錶達載體pET28a中構建重組錶達質粒pET28a-RS,轉化大腸桿菌BL21,SDS-PAGE電泳檢測結果錶明,以30C、0.5mmol·L--1PTG誘導4h時該基因錶達效果最好,誘導產物為1箇約43kD的蛋白,為進一步純化和鑒定目的蛋白提供瞭基礎.
종패체포도중제취총RNA,채용RT-PCR방법,극륭도료백려호순합매(resveratrol synthase,RS)기인적전장cDNA.장기여원협포도(Vitis rotundifolia)、화동포도(Vitis pseudoreticulata)、하남모포도(Vitis ficifolia)、하안포도(Vitis vulpine)、양주포도(Vitis virufera)、양제갑(Bauhinia)、화생(Arachis hvpogaea)、호장(Polygonum cuspiaatum)、대황(Rheum officinale)진행안기산동원성비대,결과표명:분리적RS기인여기타포도적RS기인편마적안기산동원성체도97％이상,여기타속적RS기인편마적안기산동원성체도64％이상.생물신식학분석표명,해단백분자량위43kD,등전점pI=6.2,포함392개안기산잔기.장RS적전장cDNA삽입도표체재체pET28a중구건중조표체질립pET28a-RS,전화대장간균BL21,SDS-PAGE전영검측결과표명,이30C、0.5mmol·L--1PTG유도4h시해기인표체효과최호,유도산물위1개약43kD적단백,위진일보순화화감정목적단백제공료기출.
