畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2012年
9期
1377-1384
,共8页
刘燕%罗奋华%包佳婧%刘林洪%单飞彪%吴应积
劉燕%囉奮華%包佳婧%劉林洪%單飛彪%吳應積
류연%라강화%포가청%류림홍%단비표%오응적
绵羊%Gfrα1基因%克隆%序列分析%原核表达
綿羊%Gfrα1基因%剋隆%序列分析%原覈錶達
면양%Gfrα1기인%극륭%서렬분석%원핵표체
旨在克隆绵羊Gfrα1基因序列,深入研究绵羊精原干细胞(SSCs).本研究通过RT-PCR扩增和分子克隆的方法克隆到了绵羊Gfrα1基因的编码区大部分片段.结果,克隆得到的绵羊Gfrα1基因的大部分cDNA序列长1 312 bp,包括1 311 bp的开放阅读框(ORF),编码437个氨基酸,与牛、人、黑猩猩、大鼠和小鼠相应核苷酸序列的同源性分别为98.5％、91.3％、91.0％、88.9％和88.0％.根据获得的cDNA序列,预测已知片段的抗原表位区,并将抗原表位区序列插入pET-44a(+)载体,经转化得到重组菌,经IPTG诱导表达,并通过亲和柱层析,纯化制备GFRα1抗原表位多肽.Western blot检测发现,经诱导表达的GFRα1抗原表位多肽约为18.2 ku,与预测的大小一致.绵羊Gfrα1基因的克隆和表达研究,为进一步制作该基因的多克隆抗体奠定基础,为绵羊SSCs的分子水平鉴定及功能分析提供了研究条件.
旨在剋隆綿羊Gfrα1基因序列,深入研究綿羊精原榦細胞(SSCs).本研究通過RT-PCR擴增和分子剋隆的方法剋隆到瞭綿羊Gfrα1基因的編碼區大部分片段.結果,剋隆得到的綿羊Gfrα1基因的大部分cDNA序列長1 312 bp,包括1 311 bp的開放閱讀框(ORF),編碼437箇氨基痠,與牛、人、黑猩猩、大鼠和小鼠相應覈苷痠序列的同源性分彆為98.5％、91.3％、91.0％、88.9％和88.0％.根據穫得的cDNA序列,預測已知片段的抗原錶位區,併將抗原錶位區序列插入pET-44a(+)載體,經轉化得到重組菌,經IPTG誘導錶達,併通過親和柱層析,純化製備GFRα1抗原錶位多肽.Western blot檢測髮現,經誘導錶達的GFRα1抗原錶位多肽約為18.2 ku,與預測的大小一緻.綿羊Gfrα1基因的剋隆和錶達研究,為進一步製作該基因的多剋隆抗體奠定基礎,為綿羊SSCs的分子水平鑒定及功能分析提供瞭研究條件.
지재극륭면양Gfrα1기인서렬,심입연구면양정원간세포(SSCs).본연구통과RT-PCR확증화분자극륭적방법극륭도료면양Gfrα1기인적편마구대부분편단.결과,극륭득도적면양Gfrα1기인적대부분cDNA서렬장1 312 bp,포괄1 311 bp적개방열독광(ORF),편마437개안기산,여우、인、흑성성、대서화소서상응핵감산서렬적동원성분별위98.5％、91.3％、91.0％、88.9％화88.0％.근거획득적cDNA서렬,예측이지편단적항원표위구,병장항원표위구서렬삽입pET-44a(+)재체,경전화득도중조균,경IPTG유도표체,병통과친화주층석,순화제비GFRα1항원표위다태.Western blot검측발현,경유도표체적GFRα1항원표위다태약위18.2 ku,여예측적대소일치.면양Gfrα1기인적극륭화표체연구,위진일보제작해기인적다극륭항체전정기출,위면양SSCs적분자수평감정급공능분석제공료연구조건.
