CAJ | 학술논문

目的探讨采用腺相关病毒血清型1型的衣壳蛋白构建的"假毒粒"型重组腺相关病毒(rAAV)1载体介导血管内皮生长因子(VEGF)促血管新生的可行性、有效性.方法以每个细胞105vg rAAV1-绿色荧光蛋白(GFP)及rAAV1-VEGF载体量感染C2C12细胞(小鼠成肌细胞)分化的肌管,荧光显微镜下观察rAAV1-GFP的转染效率.ELISA法检测rAAV1-VEGF转染后细胞上清中VEGF表达量.构建小鼠后肢缺血模型,术后10天每只小鼠股部缺血骨骼肌内注射3×1011vg的rAAV1-VEGF载体,载体转染后1个月ELISA法检测小鼠缺血骨骼肌中VEGF蛋白表达量.载体转染后6周免疫组化检测小鼠缺血骨骼肌中毛细血管及小动脉新生情况.结果 rAAV1-GFP感染后120 h 60%～80%的肌管可表达GFP.rAAV1-VEGF载体感染后第3天细胞上清中分泌的VEGF表达量达到高峰,VEGF浓度为(567.7 ± 16.8 )pg/ml.小鼠缺血骨骼肌中rAAV1-LacZ载体转染后1个月转染效率可达100%.rAAV1-VEGF载体转染后1个月平均VEGF浓度为(205.4 ± 36.1) pg/mg总蛋白,与对照组相比差异有统计学意义(P＜ 0.01, n=5).rAAV1-VEGF载体转染有效促进了血管新生(P＜ 0.001, n=6),载体转染6周缺血骨骼肌中毛细血管计数与小动脉计数分别为(147.0 ± 13.3)/mm2,(17.0 ± 1.2)/mm2.结论新型"假毒粒"型rAAV1-VEGF载体可能是治疗缺血性心血管疾病更为优越的基因治疗载体.
목적 탐토채용선상관병독혈청형1형적의각단백구건적"가독립"형중조선상관병독(rAAV)1재체개도혈관내피생장인자(VEGF)촉혈관신생적가행성、유효성.방법 이매개세포105vg rAAV1-록색형광단백(GFP)급rAAV1-VEGF재체량감염C2C12세포(소서성기세포)분화적기관,형광현미경하관찰rAAV1-GFP적전염효솔.ELISA법검측rAAV1-VEGF전염후세포상청중VEGF표체량.구건소서후지결혈모형,술후10천매지소서고부결혈골격기내주사3×1011vg적rAAV1-VEGF재체,재체전염후1개월ELISA법검측소서결혈골격기중VEGF단백표체량.재체전염후6주면역조화검측소서결혈골격기중모세혈관급소동맥신생정황.결과 rAAV1-GFP감염후120 h 60%～80%적기관가표체GFP.rAAV1-VEGF재체감염후제3천세포상청중분비적VEGF표체량체도고봉,VEGF농도위(567.7 ± 16.8 )pg/ml.소서결혈골격기중rAAV1-LacZ재체전염후1개월전염효솔가체100%.rAAV1-VEGF재체전염후1개월평균VEGF농도위(205.4 ± 36.1) pg/mg총단백,여대조조상비차이유통계학의의(P＜ 0.01, n=5).rAAV1-VEGF재체전염유효촉진료혈관신생(P＜ 0.001, n=6),재체전염6주결혈골격기중모세혈관계수여소동맥계수분별위(147.0 ± 13.3)/mm2,(17.0 ± 1.2)/mm2.결론 신형"가독립"형rAAV1-VEGF재체가능시치료결혈성심혈관질병경위우월적기인치료재체.