上海口腔医学
上海口腔醫學
상해구강의학
SHANGHAI JOURNAL OF STOMATOLOGY
2007年
3期
263-267
,共5页
结合上皮%细胞培养%细胞冻存%免疫细胞化学
結閤上皮%細胞培養%細胞凍存%免疫細胞化學
결합상피%세포배양%세포동존%면역세포화학
目的:改良人结合上皮(junctional epithelium,JE)细胞的分离培养及冻存方法.方法:取正畸拔除的牙周组织健康的前磨牙,沿龈缘剪去冠方1mm左右的沟内上皮,用无菌11号刀片紧贴牙面刮下、剪碎JE组织,简化培养操作步骤.取第2代JE细胞,加入冻存液,按设定的降温程序(从0℃开始,以每分钟下降1.5℃速度下降至-18℃,保持5min;再以每分钟下降20℃的速度降至-80℃,然后投入-196℃液氮罐)冻存细胞,40℃水浴复苏,进一步研究JE细胞的形态、增殖、鉴定及复苏后存活率等生物学活性.结果:不用Dispase冷消化,采用0.1%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化,同样可成功地培养人JE细胞;JE细胞复苏后的存活率为(93.87+3.11)%,生长状况良好,与第2代细胞相似;免疫细胞化学染色显示,培养的JE细胞角蛋白-19(cytokeratin-19.CK19)表达强阳性,而波形丝蛋白(vimentin)表达也为阳性.结论:改良的JE分离培养与冻存方法可行,JE表型在体内和体外并非完全一致,可能与细胞生长的底物有关.
目的:改良人結閤上皮(junctional epithelium,JE)細胞的分離培養及凍存方法.方法:取正畸拔除的牙週組織健康的前磨牙,沿齦緣剪去冠方1mm左右的溝內上皮,用無菌11號刀片緊貼牙麵颳下、剪碎JE組織,簡化培養操作步驟.取第2代JE細胞,加入凍存液,按設定的降溫程序(從0℃開始,以每分鐘下降1.5℃速度下降至-18℃,保持5min;再以每分鐘下降20℃的速度降至-80℃,然後投入-196℃液氮罐)凍存細胞,40℃水浴複囌,進一步研究JE細胞的形態、增殖、鑒定及複囌後存活率等生物學活性.結果:不用Dispase冷消化,採用0.1%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化,同樣可成功地培養人JE細胞;JE細胞複囌後的存活率為(93.87+3.11)%,生長狀況良好,與第2代細胞相似;免疫細胞化學染色顯示,培養的JE細胞角蛋白-19(cytokeratin-19.CK19)錶達彊暘性,而波形絲蛋白(vimentin)錶達也為暘性.結論:改良的JE分離培養與凍存方法可行,JE錶型在體內和體外併非完全一緻,可能與細胞生長的底物有關.
목적:개량인결합상피(junctional epithelium,JE)세포적분리배양급동존방법.방법:취정기발제적아주조직건강적전마아,연간연전거관방1mm좌우적구내상피,용무균11호도편긴첩아면괄하、전쇄JE조직,간화배양조작보취.취제2대JE세포,가입동존액,안설정적강온정서(종0℃개시,이매분종하강1.5℃속도하강지-18℃,보지5min;재이매분종하강20℃적속도강지-80℃,연후투입-196℃액담관)동존세포,40℃수욕복소,진일보연구JE세포적형태、증식、감정급복소후존활솔등생물학활성.결과:불용Dispase랭소화,채용0.1%이단백매-0.02%EDTA소화,동양가성공지배양인JE세포;JE세포복소후적존활솔위(93.87+3.11)%,생장상황량호,여제2대세포상사;면역세포화학염색현시,배양적JE세포각단백-19(cytokeratin-19.CK19)표체강양성,이파형사단백(vimentin)표체야위양성.결론:개량적JE분리배양여동존방법가행,JE표형재체내화체외병비완전일치,가능여세포생장적저물유관.
