CAJ | 학술논문

背景与目的:根据富含脯氨酸的核受体辅调节蛋白(proline-rich nuclear receptor coregulatory protein,PNRC)与Grb2相互作用位点资料和其他基于干扰Grb2/SH3与SOS的相互作用的富含脯氨酸短肽的设计原则,我们设计、合成了基于PNRC的抗Ras、PTD融合多肽(PTD-PARP),研究该多肽在BT474乳腺癌细胞中对Ras信号途径的影响及其抗肿瘤增殖活性.方法:用多肽合成仪合成PNRC的抗Ras PTD融合多肽PTD-PARP和其单独的PTD多肽.以PTD多肽为对照,将增加浓度的PTD-PARP与分离的、EGF刺激的BT474细胞裂解物共温育,采用免疫共沉淀结合Western blot检测Grb2免疫共沉淀复合物中SOS和PNRC的含量情况.用PTD-PARP-琼脂糖凝胶4B活化偶联磁珠免疫共沉淀BT474细胞裂解物,采用P13K,Nck和Grb2的抗体检测沉淀复合物中这些含SH3结构域的蛋白与PTD-PARP的结合能力.Western blot检测PTD-PARP对EGF刺激的BT474细胞内Ras和MAPK活化的影响.采用软琼脂克隆形成实验考察PTD-PARP对BT474细胞体外增殖的影响.结果:PTD-PARP能以剂量依赖方式抑制SOS、PNRC与Grb2的结合,它与Grb2的结合具有特异性,PTD-PARP能降低BT474细胞中EGF刺激的Ras和MAKP活化,并能显著抑制BT474细胞的体外软琼脂克隆形成.结论:PNRC抗Ras PTD融合多肽可通过影响Ras信号途径抑制乳腺癌细胞的增殖.
배경여목적:근거부함포안산적핵수체보조절단백(proline-rich nuclear receptor coregulatory protein,PNRC)여Grb2상호작용위점자료화기타기우간우Grb2/SH3여SOS적상호작용적부함포안산단태적설계원칙,아문설계、합성료기우PNRC적항Ras、PTD융합다태(PTD-PARP),연구해다태재BT474유선암세포중대Ras신호도경적영향급기항종류증식활성.방법:용다태합성의합성PNRC적항Ras PTD융합다태PTD-PARP화기단독적PTD다태.이PTD다태위대조,장증가농도적PTD-PARP여분리적、EGF자격적BT474세포렬해물공온육,채용면역공침정결합Western blot검측Grb2면역공침정복합물중SOS화PNRC적함량정황.용PTD-PARP-경지당응효4B활화우련자주면역공침정BT474세포렬해물,채용P13K,Nck화Grb2적항체검측침정복합물중저사함SH3결구역적단백여PTD-PARP적결합능력.Western blot검측PTD-PARP대EGF자격적BT474세포내Ras화MAPK활화적영향.채용연경지극륭형성실험고찰PTD-PARP대BT474세포체외증식적영향.결과:PTD-PARP능이제량의뢰방식억제SOS、PNRC여Grb2적결합,타여Grb2적결합구유특이성,PTD-PARP능강저BT474세포중EGF자격적Ras화MAKP활화,병능현저억제BT474세포적체외연경지극륭형성.결론:PNRC항Ras PTD융합다태가통과영향Ras신호도경억제유선암세포적증식.