生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2009年
2期
23-26
,共4页
沈麟%施文芳%胡长浩%林琳
瀋麟%施文芳%鬍長浩%林琳
침린%시문방%호장호%림림
扩展青霉脂肪酶%叠加突变%热稳定性
擴展青黴脂肪酶%疊加突變%熱穩定性
확전청매지방매%첩가돌변%열은정성
目的:扩展青霉脂肪酶随机突变体ep8是一株热稳定性比野生型有所提高的突变体.获得热稳定性提高的优良菌株.方法:在ep8的基础上利用重叠延伸PCR构建叠加突变重组质粒pPIC3.5K-ep8一K56R,将该质粒电转毕赤酵母(Pichia paaoris)GS115进行异源表达.结果:该叠加突变脂肪酶在毕赤酵母中获得了活性表达.15%SDS-PACE结果分析表明突变脂肪酶PEL-ep8-K56R-GS分子量与野生型PEL-GS一致,约为28kDa.叠加突变脂肪酶在37℃时酶活为852U/mL、野生型为760u/mL、随机突变体为824u/mL,叠加突变体酶活相比野生型提高了21.1%,相比随机突变体提高了3.4%.热稳定性分析数据表明叠加突变脂肪酶Tm值为40.1℃、野生型为38.7℃、随机突变体为39.9℃,Tm值相比野生型提高了1.4℃,相比随机突变体提高了0.2℃.
目的:擴展青黴脂肪酶隨機突變體ep8是一株熱穩定性比野生型有所提高的突變體.穫得熱穩定性提高的優良菌株.方法:在ep8的基礎上利用重疊延伸PCR構建疊加突變重組質粒pPIC3.5K-ep8一K56R,將該質粒電轉畢赤酵母(Pichia paaoris)GS115進行異源錶達.結果:該疊加突變脂肪酶在畢赤酵母中穫得瞭活性錶達.15%SDS-PACE結果分析錶明突變脂肪酶PEL-ep8-K56R-GS分子量與野生型PEL-GS一緻,約為28kDa.疊加突變脂肪酶在37℃時酶活為852U/mL、野生型為760u/mL、隨機突變體為824u/mL,疊加突變體酶活相比野生型提高瞭21.1%,相比隨機突變體提高瞭3.4%.熱穩定性分析數據錶明疊加突變脂肪酶Tm值為40.1℃、野生型為38.7℃、隨機突變體為39.9℃,Tm值相比野生型提高瞭1.4℃,相比隨機突變體提高瞭0.2℃.
목적:확전청매지방매수궤돌변체ep8시일주열은정성비야생형유소제고적돌변체.획득열은정성제고적우량균주.방법:재ep8적기출상이용중첩연신PCR구건첩가돌변중조질립pPIC3.5K-ep8일K56R,장해질립전전필적효모(Pichia paaoris)GS115진행이원표체.결과:해첩가돌변지방매재필적효모중획득료활성표체.15%SDS-PACE결과분석표명돌변지방매PEL-ep8-K56R-GS분자량여야생형PEL-GS일치,약위28kDa.첩가돌변지방매재37℃시매활위852U/mL、야생형위760u/mL、수궤돌변체위824u/mL,첩가돌변체매활상비야생형제고료21.1%,상비수궤돌변체제고료3.4%.열은정성분석수거표명첩가돌변지방매Tm치위40.1℃、야생형위38.7℃、수궤돌변체위39.9℃,Tm치상비야생형제고료1.4℃,상비수궤돌변체제고료0.2℃.
