科技通报
科技通報
과기통보
BULLETIN OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
2010年
1期
81-87
,共7页
胡贵玉%王文兵%盛晔%黄光镁%石瑞英%金玉婷%朱江
鬍貴玉%王文兵%盛曄%黃光鎂%石瑞英%金玉婷%硃江
호귀옥%왕문병%성엽%황광미%석서영%금옥정%주강
斜纹夜蛾%核型多角体病毒%pif-2基因%原核表达
斜紋夜蛾%覈型多角體病毒%pif-2基因%原覈錶達
사문야아%핵형다각체병독%pif-2기인%원핵표체
为研究斜纹夜蛾核型多角体病毒(spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus,SpltMN-PV)侵染规律,根据SphMNPV中国株(G2)ORF135基因序列设计引物,经PCR扩增,从SpltMNPV日本株(B)基因组中克隆了pif-2基因.核苷酸序列分析表明,该基因是甜菜夜蛾核型多角体病毒(spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)pff-2的同源物,读码框含1278 bp,编码425个氨基酸的蛋白质,推定分子量为48.6 kD.与其他杆状病毒的同源物比对显示,SphMNPV-JP-B PIF-2蛋白中14个Cys残基高度保守.联配分析表明,SpltMNPV-JP-B pif-2的核苷酸序列与其他13种核型多角体病毒的同源性有较大差异.将pif-2克隆至原核表达载体pET32a(+),经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21中获得了融合表达,SDS-PAGE分析表明在约69 kD处有特异性表达条带,经Western blot验证该蛋白即为融合表达的目的蛋白.
為研究斜紋夜蛾覈型多角體病毒(spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus,SpltMN-PV)侵染規律,根據SphMNPV中國株(G2)ORF135基因序列設計引物,經PCR擴增,從SpltMNPV日本株(B)基因組中剋隆瞭pif-2基因.覈苷痠序列分析錶明,該基因是甜菜夜蛾覈型多角體病毒(spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)pff-2的同源物,讀碼框含1278 bp,編碼425箇氨基痠的蛋白質,推定分子量為48.6 kD.與其他桿狀病毒的同源物比對顯示,SphMNPV-JP-B PIF-2蛋白中14箇Cys殘基高度保守.聯配分析錶明,SpltMNPV-JP-B pif-2的覈苷痠序列與其他13種覈型多角體病毒的同源性有較大差異.將pif-2剋隆至原覈錶達載體pET32a(+),經IPTG誘導後在大腸桿菌BL21中穫得瞭融閤錶達,SDS-PAGE分析錶明在約69 kD處有特異性錶達條帶,經Western blot驗證該蛋白即為融閤錶達的目的蛋白.
위연구사문야아핵형다각체병독(spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus,SpltMN-PV)침염규률,근거SphMNPV중국주(G2)ORF135기인서렬설계인물,경PCR확증,종SpltMNPV일본주(B)기인조중극륭료pif-2기인.핵감산서렬분석표명,해기인시첨채야아핵형다각체병독(spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)pff-2적동원물,독마광함1278 bp,편마425개안기산적단백질,추정분자량위48.6 kD.여기타간상병독적동원물비대현시,SphMNPV-JP-B PIF-2단백중14개Cys잔기고도보수.련배분석표명,SpltMNPV-JP-B pif-2적핵감산서렬여기타13충핵형다각체병독적동원성유교대차이.장pif-2극륭지원핵표체재체pET32a(+),경IPTG유도후재대장간균BL21중획득료융합표체,SDS-PAGE분석표명재약69 kD처유특이성표체조대,경Western blot험증해단백즉위융합표체적목적단백.
