中国病毒学
中國病毒學
중국병독학
VIROLOGICA SINICA
2003年
5期
437-440
,共4页
刘东瀛%肖红%郭广松%文利%叶梦贻%杨占秋
劉東瀛%肖紅%郭廣鬆%文利%葉夢貽%楊佔鞦
류동영%초홍%곽엄송%문리%협몽이%양점추
白蛉热病毒%M片段%RT-PCR
白蛉熱病毒%M片段%RT-PCR
백령열병독%M편단%RT-PCR
为建立扩增未知序列白蛉热病毒M片段的RT-PCR方法,本研究选取7个血清组成员和8个未分组血清型,共42株白蛉热病毒为RT-PCR检测对象.通过排列GenBank中已知的4型白蛉热病毒M片段氨基酸序列,选择保守区设计引物.根据保守区各已知病毒的cDNA特异序列合成寡核苷酸,将相同区的寡核苷酸等量混合成为"鸡尾酒"引物,用于RT-PCR.扩增产物经电泳检测,纯化后直接测序.引物对Ph-M-2FM和Ph-M-3RM扩增产物长度约为600bp,从42株病毒中扩增出34株,阳性率为81.0%.另一引物对Ph-M-2FM和Ph-M-4R2M扩增产物长度约为1400bp,扩增出22株病毒,阳性率为52.3%.测出序列经BLAST检索,与GenBank中已知白蛉热病毒同源.本研究首次成功地应用RT-PCR扩增不同血清型未知序列白蛉热病毒的部分M片段,并测出扩增产物序列,为白蛉热病毒属成员的基因鉴定和种系发生关系分析提供了实验手段,并将有助于白蛉热病毒感染的基因诊断.
為建立擴增未知序列白蛉熱病毒M片段的RT-PCR方法,本研究選取7箇血清組成員和8箇未分組血清型,共42株白蛉熱病毒為RT-PCR檢測對象.通過排列GenBank中已知的4型白蛉熱病毒M片段氨基痠序列,選擇保守區設計引物.根據保守區各已知病毒的cDNA特異序列閤成寡覈苷痠,將相同區的寡覈苷痠等量混閤成為"鷄尾酒"引物,用于RT-PCR.擴增產物經電泳檢測,純化後直接測序.引物對Ph-M-2FM和Ph-M-3RM擴增產物長度約為600bp,從42株病毒中擴增齣34株,暘性率為81.0%.另一引物對Ph-M-2FM和Ph-M-4R2M擴增產物長度約為1400bp,擴增齣22株病毒,暘性率為52.3%.測齣序列經BLAST檢索,與GenBank中已知白蛉熱病毒同源.本研究首次成功地應用RT-PCR擴增不同血清型未知序列白蛉熱病毒的部分M片段,併測齣擴增產物序列,為白蛉熱病毒屬成員的基因鑒定和種繫髮生關繫分析提供瞭實驗手段,併將有助于白蛉熱病毒感染的基因診斷.
위건립확증미지서렬백령열병독M편단적RT-PCR방법,본연구선취7개혈청조성원화8개미분조혈청형,공42주백령열병독위RT-PCR검측대상.통과배렬GenBank중이지적4형백령열병독M편단안기산서렬,선택보수구설계인물.근거보수구각이지병독적cDNA특이서렬합성과핵감산,장상동구적과핵감산등량혼합성위"계미주"인물,용우RT-PCR.확증산물경전영검측,순화후직접측서.인물대Ph-M-2FM화Ph-M-3RM확증산물장도약위600bp,종42주병독중확증출34주,양성솔위81.0%.령일인물대Ph-M-2FM화Ph-M-4R2M확증산물장도약위1400bp,확증출22주병독,양성솔위52.3%.측출서렬경BLAST검색,여GenBank중이지백령열병독동원.본연구수차성공지응용RT-PCR확증불동혈청형미지서렬백령열병독적부분M편단,병측출확증산물서렬,위백령열병독속성원적기인감정화충계발생관계분석제공료실험수단,병장유조우백령열병독감염적기인진단.
