西北农业学报
西北農業學報
서북농업학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-OCCIDENTALIS SINICA
2005年
6期
78-82
,共5页
朱建楚%胡银岗%奚亚军%于新智%王新中%布都会
硃建楚%鬍銀崗%奚亞軍%于新智%王新中%佈都會
주건초%호은강%해아군%우신지%왕신중%포도회
实时荧光定量PCR%外源基因%拷贝数
實時熒光定量PCR%外源基因%拷貝數
실시형광정량PCR%외원기인%고패수
通过对PCR法、Southern Blot法、IPCR法与实时荧光定量法4种转基因外源基因检测方法的比较认为:PCR扩增虽十分灵敏,但有时会出现假阳性扩增,因而对外源基因是否整合还需进行验证.Southren方法准确性高,特异性强,但存在费时、费力的缺点.同时实际操作中就需要较大量的植物材料来提取DNA,而转基因植物的愈伤组织在无菌条件下经过筛选、重新分化后,一般都比较细弱,不宜大量取样.IPCR法虽可以转座突变分离基因,但当转座子作为外源基因通过农杆菌介导等方法导入植物时,由于T DNA整合到染色体中引起插入突变并分离基因造成误差.实时定量PCR技术的特异性和高信噪比为转基因拷贝数定量提供了方便,实时定量PCR法,花费试剂少、节省劳力和时间,需要DNA样品量少、并不进行放射检测.同时对实时荧光定量PCR法计算进行了详细介绍.
通過對PCR法、Southern Blot法、IPCR法與實時熒光定量法4種轉基因外源基因檢測方法的比較認為:PCR擴增雖十分靈敏,但有時會齣現假暘性擴增,因而對外源基因是否整閤還需進行驗證.Southren方法準確性高,特異性彊,但存在費時、費力的缺點.同時實際操作中就需要較大量的植物材料來提取DNA,而轉基因植物的愈傷組織在無菌條件下經過篩選、重新分化後,一般都比較細弱,不宜大量取樣.IPCR法雖可以轉座突變分離基因,但噹轉座子作為外源基因通過農桿菌介導等方法導入植物時,由于T DNA整閤到染色體中引起插入突變併分離基因造成誤差.實時定量PCR技術的特異性和高信譟比為轉基因拷貝數定量提供瞭方便,實時定量PCR法,花費試劑少、節省勞力和時間,需要DNA樣品量少、併不進行放射檢測.同時對實時熒光定量PCR法計算進行瞭詳細介紹.
통과대PCR법、Southern Blot법、IPCR법여실시형광정량법4충전기인외원기인검측방법적비교인위:PCR확증수십분령민,단유시회출현가양성확증,인이대외원기인시부정합환수진행험증.Southren방법준학성고,특이성강,단존재비시、비력적결점.동시실제조작중취수요교대량적식물재료래제취DNA,이전기인식물적유상조직재무균조건하경과사선、중신분화후,일반도비교세약,불의대량취양.IPCR법수가이전좌돌변분리기인,단당전좌자작위외원기인통과농간균개도등방법도입식물시,유우T DNA정합도염색체중인기삽입돌변병분리기인조성오차.실시정량PCR기술적특이성화고신조비위전기인고패수정량제공료방편,실시정량PCR법,화비시제소、절성로력화시간,수요DNA양품량소、병불진행방사검측.동시대실시형광정량PCR법계산진행료상세개소.
