现代免疫学
現代免疫學
현대면역학
CURRENT IMMUNOLOGY
2006年
4期
302-305
,共4页
邱玉华%马泓冰%程钢%孙玮丽%孙中文%周立峰%张学光
邱玉華%馬泓冰%程鋼%孫瑋麗%孫中文%週立峰%張學光
구옥화%마홍빙%정강%손위려%손중문%주립봉%장학광
重组%可溶性gp130%单克隆抗体%亲和层析%纯度%生物学活性
重組%可溶性gp130%單剋隆抗體%親和層析%純度%生物學活性
중조%가용성gp130%단극륭항체%친화층석%순도%생물학활성
采用转瓶培养可溶性gp130基因转染细胞.运用免疫亲和层析法,将抗人可溶性gp130的单克隆抗体偶联于CNBr活化的Sepharose 4B.收获基因转染细胞的培养上清,经抗gp130单抗/Sepharose 4B亲和层析柱吸附,用pH 2.8、 0.1 mol/L甘氨酸溶液洗脱,获取可溶性gp130重组蛋白纯品.基因转染细胞培养上清中可溶性gp130的表达量为100～120 μg/ml,纯化后的回收率为70%～75%,SDS-PAGE电泳后出现一条蛋白曲带.经Western blot分析,纯化的可溶性gp130能与特异性抗体结合.将可溶性gp130(终浓度为5 μg/ml)与IL-6依赖性生长细胞株XG2共同培养,细胞的生长与增殖出现抑制.提示经免疫亲和层析法纯化的可溶性gp130具有良好的生物学活性.
採用轉瓶培養可溶性gp130基因轉染細胞.運用免疫親和層析法,將抗人可溶性gp130的單剋隆抗體偶聯于CNBr活化的Sepharose 4B.收穫基因轉染細胞的培養上清,經抗gp130單抗/Sepharose 4B親和層析柱吸附,用pH 2.8、 0.1 mol/L甘氨痠溶液洗脫,穫取可溶性gp130重組蛋白純品.基因轉染細胞培養上清中可溶性gp130的錶達量為100～120 μg/ml,純化後的迴收率為70%～75%,SDS-PAGE電泳後齣現一條蛋白麯帶.經Western blot分析,純化的可溶性gp130能與特異性抗體結閤.將可溶性gp130(終濃度為5 μg/ml)與IL-6依賴性生長細胞株XG2共同培養,細胞的生長與增殖齣現抑製.提示經免疫親和層析法純化的可溶性gp130具有良好的生物學活性.
채용전병배양가용성gp130기인전염세포.운용면역친화층석법,장항인가용성gp130적단극륭항체우련우CNBr활화적Sepharose 4B.수획기인전염세포적배양상청,경항gp130단항/Sepharose 4B친화층석주흡부,용pH 2.8、 0.1 mol/L감안산용액세탈,획취가용성gp130중조단백순품.기인전염세포배양상청중가용성gp130적표체량위100～120 μg/ml,순화후적회수솔위70%～75%,SDS-PAGE전영후출현일조단백곡대.경Western blot분석,순화적가용성gp130능여특이성항체결합.장가용성gp130(종농도위5 μg/ml)여IL-6의뢰성생장세포주XG2공동배양,세포적생장여증식출현억제.제시경면역친화층석법순화적가용성gp130구유량호적생물학활성.
