CAJ | 학술논문

目的观察半边旗二萜类化合物5F(5F)对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)的致凋亡作用及其对凋亡相关的半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达的影响.方法采用5F不同药物浓度组(0,8,32,128 mg·L-1)作用不同时间处理细胞.噻唑蓝比色法检测5F对细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;RT-PCR检测细胞内凋亡相关基因caspase-3的转录水平;Western blot检测细胞caspase-3蛋白表达;化学比色法检测细胞凋亡过程中caspase-3活性的变化.结果给药组细胞的生长与对照组相比均受到显著的抑制(P＜0.01),细胞增殖抑制率呈剂量和时间的依赖关系;Hoechst33258荧光染色显示,给药组部分细胞呈典型的凋亡表现;流式细胞术检测在32 mg·L-1浓度作用下,12 h即出现"凋亡峰",其峰值达(12.48±1.29)%;RT-PCR检测发现细胞内凋亡相关基因caspase-3 mRNA表达上调;Western blot检测细胞caspase-3蛋白表达水平升高;caspase-3活性检测显示,其活性呈剂量和时间依赖性增高,5F浓度达到128 mg·L-1时,其活性为对照组的3.52倍.结论5F可显著地抑制HPF增殖、诱导细胞凋亡、升高caspase-3活性,并呈明显的量效与时效关系;其诱导细胞凋亡的作用机制可能与升高caspase-3活性,促进caspase-3基因转录和蛋白翻译,使细胞内caspase-3增加从而促进细胞凋亡有关.
목적관찰반변기이첩류화합물5F(5F)대체외배양적인익상노육성섬유세포(HPF)적치조망작용급기대조망상관적반광안산단백매3(caspase-3)표체적영향.방법채용5F불동약물농도조(0,8,32,128 mg·L-1)작용불동시간처리세포.새서람비색법검측5F대세포증식적영향;Hoechst33258형광염색법관찰세포조망;류식세포술검측세포주기급조망;RT-PCR검측세포내조망상관기인caspase-3적전록수평;Western blot검측세포caspase-3단백표체;화학비색법검측세포조망과정중caspase-3활성적변화.결과급약조세포적생장여대조조상비균수도현저적억제(P＜0.01),세포증식억제솔정제량화시간적의뢰관계;Hoechst33258형광염색현시,급약조부분세포정전형적조망표현;류식세포술검측재32 mg·L-1농도작용하,12 h즉출현"조망봉",기봉치체(12.48±1.29)%;RT-PCR검측발현세포내조망상관기인caspase-3 mRNA표체상조;Western blot검측세포caspase-3단백표체수평승고;caspase-3활성검측현시,기활성정제량화시간의뢰성증고,5F농도체도128 mg·L-1시,기활성위대조조적3.52배.결론5F가현저지억제HPF증식、유도세포조망、승고caspase-3활성,병정명현적량효여시효관계;기유도세포조망적작용궤제가능여승고caspase-3활성,촉진caspase-3기인전록화단백번역,사세포내caspase-3증가종이촉진세포조망유관.