西北农业学报
西北農業學報
서북농업학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-OCCIDENTALIS SINICA
2008年
3期
37-41
,共5页
李义书%王新庄%冯勋伟%王轶敏%李金辉
李義書%王新莊%馮勛偉%王軼敏%李金輝
리의서%왕신장%풍훈위%왕질민%리금휘
兔原始生殖细胞%共培养%胚胎干细胞%兔睾丸支持细胞
兔原始生殖細胞%共培養%胚胎榦細胞%兔睪汍支持細胞
토원시생식세포%공배양%배태간세포%토고환지지세포
为了探讨不同饲养层细胞对兔原始生殖细胞体外培养与传代的影响,从14～18d的兔胎儿生殖嵴中分离得到原始生殖细胞(PGCs),分别培养在小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)、兔胎儿成纤维细胞(REF)饲养层上或与同源兔胎儿生殖脊成纤维细胞(HEFgr)、兔睾丸支持细胞(RSC)共培养.观察兔类EG集落的生长状态,并检测其碱性磷酸酶活性.结果表明:4种方法均能分离克隆出兔类EG集落,碱性磷酸酶染色均呈阳性,但是采用共培养的模式分离得到的集落明显多于传统的饲养层模式.与RSCs共培养得到的EG集落数最多,保持未分化的时间最长,并传了8代,与HEFgr共培养得到的EG集落数与RSCs相比差异不明显,但最高只传了6代.培养在MEF上的兔类EG也能较好的保持未分化状态,传了4代.培养在REF上的兔类EG集落数目较少,出现分化时间较早,只传了3代.因此可以用与RSCs或HEFgr共培养的方法传代培养兔PGCs.
為瞭探討不同飼養層細胞對兔原始生殖細胞體外培養與傳代的影響,從14～18d的兔胎兒生殖嵴中分離得到原始生殖細胞(PGCs),分彆培養在小鼠胎兒成纖維細胞(MEF)、兔胎兒成纖維細胞(REF)飼養層上或與同源兔胎兒生殖脊成纖維細胞(HEFgr)、兔睪汍支持細胞(RSC)共培養.觀察兔類EG集落的生長狀態,併檢測其堿性燐痠酶活性.結果錶明:4種方法均能分離剋隆齣兔類EG集落,堿性燐痠酶染色均呈暘性,但是採用共培養的模式分離得到的集落明顯多于傳統的飼養層模式.與RSCs共培養得到的EG集落數最多,保持未分化的時間最長,併傳瞭8代,與HEFgr共培養得到的EG集落數與RSCs相比差異不明顯,但最高隻傳瞭6代.培養在MEF上的兔類EG也能較好的保持未分化狀態,傳瞭4代.培養在REF上的兔類EG集落數目較少,齣現分化時間較早,隻傳瞭3代.因此可以用與RSCs或HEFgr共培養的方法傳代培養兔PGCs.
위료탐토불동사양층세포대토원시생식세포체외배양여전대적영향,종14～18d적토태인생식척중분리득도원시생식세포(PGCs),분별배양재소서태인성섬유세포(MEF)、토태인성섬유세포(REF)사양층상혹여동원토태인생식척성섬유세포(HEFgr)、토고환지지세포(RSC)공배양.관찰토류EG집락적생장상태,병검측기감성린산매활성.결과표명:4충방법균능분리극륭출토류EG집락,감성린산매염색균정양성,단시채용공배양적모식분리득도적집락명현다우전통적사양층모식.여RSCs공배양득도적EG집락수최다,보지미분화적시간최장,병전료8대,여HEFgr공배양득도적EG집락수여RSCs상비차이불명현,단최고지전료6대.배양재MEF상적토류EG야능교호적보지미분화상태,전료4대.배양재REF상적토류EG집락수목교소,출현분화시간교조,지전료3대.인차가이용여RSCs혹HEFgr공배양적방법전대배양토PGCs.
