组织工程与重建外科杂志
組織工程與重建外科雜誌
조직공정여중건외과잡지
JOURNAL OF TISSUE ENGINEERING AND RECONSTRUCTIVE SURGERY
2009年
5期
267-271
,共5页
流式细胞仪%淋巴管内皮细胞%细胞分选%细胞培养
流式細胞儀%淋巴管內皮細胞%細胞分選%細胞培養
류식세포의%림파관내피세포%세포분선%세포배양
目的 用流式细胞仪分选培养人真皮来源淋巴管内皮细胞,研究其生物学特点.方法 采用中性蛋白酶及胶原酶消化包皮组织获得真皮细胞悬液,应用流式细胞仪检测和分选 Podoplanin+和 Podoplanin-/CD34+细胞,所获细胞进行体外培养.传代细胞进行免疫荧光及RT-PCR方法 检测LECs特异标志的表达,低密度脂蛋白吞噬、鼠尾胶原三维培养检测功能特点,MTT法及氚标记法测定细胞增殖周期和低氧条件对其增殖的影响.结果 人真皮细胞中CD31+,CD34+和 Podoplanin+细胞所占比例分别是6.0%,4.4%和1.4%.Podoplanin+和CD34+细胞在单层培养时形成内皮细胞典型的铺路石样外观,表达内皮细胞特异性标志CD31及吞噬Dil-Ac-LDL和三维培养微管形成功能.Podoplanin+细胞表达淋巴管内皮细胞特异性标志Prox-1,Ang2和VEGFR-3,和CD34+细胞间具有显著性差异.两组细胞生长曲线相似均于接种至培养板后的3～5d逐渐进入对数生长期,接种后的6～8d均进入停滞期.在缺氧环境下,氯化钴浓度为50μM和100 μM时刺激细胞增殖,当浓度大于200 μM细胞增殖明显受到抑制.结论 应用流式细胞仪可以富集人真皮来源淋巴管内皮细胞和血管内皮细胞,尽管两者表达特异性分子标志不同,其在三维培养和缺氧条件下生长特点相似.
目的 用流式細胞儀分選培養人真皮來源淋巴管內皮細胞,研究其生物學特點.方法 採用中性蛋白酶及膠原酶消化包皮組織穫得真皮細胞懸液,應用流式細胞儀檢測和分選 Podoplanin+和 Podoplanin-/CD34+細胞,所穫細胞進行體外培養.傳代細胞進行免疫熒光及RT-PCR方法 檢測LECs特異標誌的錶達,低密度脂蛋白吞噬、鼠尾膠原三維培養檢測功能特點,MTT法及氚標記法測定細胞增殖週期和低氧條件對其增殖的影響.結果 人真皮細胞中CD31+,CD34+和 Podoplanin+細胞所佔比例分彆是6.0%,4.4%和1.4%.Podoplanin+和CD34+細胞在單層培養時形成內皮細胞典型的鋪路石樣外觀,錶達內皮細胞特異性標誌CD31及吞噬Dil-Ac-LDL和三維培養微管形成功能.Podoplanin+細胞錶達淋巴管內皮細胞特異性標誌Prox-1,Ang2和VEGFR-3,和CD34+細胞間具有顯著性差異.兩組細胞生長麯線相似均于接種至培養闆後的3～5d逐漸進入對數生長期,接種後的6～8d均進入停滯期.在缺氧環境下,氯化鈷濃度為50μM和100 μM時刺激細胞增殖,噹濃度大于200 μM細胞增殖明顯受到抑製.結論 應用流式細胞儀可以富集人真皮來源淋巴管內皮細胞和血管內皮細胞,儘管兩者錶達特異性分子標誌不同,其在三維培養和缺氧條件下生長特點相似.
목적 용류식세포의분선배양인진피래원림파관내피세포,연구기생물학특점.방법 채용중성단백매급효원매소화포피조직획득진피세포현액,응용류식세포의검측화분선 Podoplanin+화 Podoplanin-/CD34+세포,소획세포진행체외배양.전대세포진행면역형광급RT-PCR방법 검측LECs특이표지적표체,저밀도지단백탄서、서미효원삼유배양검측공능특점,MTT법급천표기법측정세포증식주기화저양조건대기증식적영향.결과 인진피세포중CD31+,CD34+화 Podoplanin+세포소점비례분별시6.0%,4.4%화1.4%.Podoplanin+화CD34+세포재단층배양시형성내피세포전형적포로석양외관,표체내피세포특이성표지CD31급탄서Dil-Ac-LDL화삼유배양미관형성공능.Podoplanin+세포표체림파관내피세포특이성표지Prox-1,Ang2화VEGFR-3,화CD34+세포간구유현저성차이.량조세포생장곡선상사균우접충지배양판후적3～5d축점진입대수생장기,접충후적6～8d균진입정체기.재결양배경하,록화고농도위50μM화100 μM시자격세포증식,당농도대우200 μM세포증식명현수도억제.결론 응용류식세포의가이부집인진피래원림파관내피세포화혈관내피세포,진관량자표체특이성분자표지불동,기재삼유배양화결양조건하생장특점상사.
