南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2010年
8期
1779-1782
,共4页
邓凡%王春霞%许万福%冯丽%柯志勇%Wang Q.Jane%邹志鹏
鄧凡%王春霞%許萬福%馮麗%柯誌勇%Wang Q.Jane%鄒誌鵬
산범%왕춘하%허만복%풍려%가지용%Wang Q.Jane%추지붕
蛋白激酶D3%雄激素受体%前列腺癌%前列腺特异性抗原
蛋白激酶D3%雄激素受體%前列腺癌%前列腺特異性抗原
단백격매D3%웅격소수체%전렬선암%전렬선특이성항원
目的 研究蛋白激酶D3(PKD3)对前列腺癌细胞中前列腺特异性抗原(PSA)表达水平的影响及其机制,以期阐明PKD3在雄激素依赖的前列腺癌细胞增殖中的重要作用.方法 首先,在LNCaP细胞中过表达PKD3并以双氢睾酮刺激,而后采用荧光定量PCR扩增PSA的cDNA并使用2-△△α方法比较其相对表达量的变化;其次,在HEK293细胞中,共转染PKD3的野生型质粒(或无激酶活性的突变型质粒)、AR的表达质粒、AR转录活性的报告质粒pMMTV-luc及内参照报告质粒pRL-SV40,并以双氢睪酮刺激后,以Promega的双报告基凶分析试剂盒测定AR的转录活性.最后,利用共聚焦显微技术分析LNCaP细胞中内源性的PKD3和AR在有无双氢睾酮刺激时亚细胞定位的变化和可能的共定位.结果 在LNCaP细胞中,过表达PKD3可明显升高双氢睾酮刺激时PSA的mRNA表达水平(P<0.001).与之相符,在HEK293细胞中,过表达PKD3明显提高双氢睾酮刺激时AR的转录活性(P<0.001),而过表达无激酶活性的PKD3可部分降低AR的转录活性(P<0.01).此外,LNCaP细胞中内源性的PKD3和AR在双氢睾酮刺激时均向核内转位并共定位于核内.结论 PKD3增强双氢睾酮刺激的前列腺癌细胞中AR的转录活性及上调PSA的表达,提示PKD3可能参与雄激素依赖的前列腺细胞的生长和恶性增殖.
目的 研究蛋白激酶D3(PKD3)對前列腺癌細胞中前列腺特異性抗原(PSA)錶達水平的影響及其機製,以期闡明PKD3在雄激素依賴的前列腺癌細胞增殖中的重要作用.方法 首先,在LNCaP細胞中過錶達PKD3併以雙氫睪酮刺激,而後採用熒光定量PCR擴增PSA的cDNA併使用2-△△α方法比較其相對錶達量的變化;其次,在HEK293細胞中,共轉染PKD3的野生型質粒(或無激酶活性的突變型質粒)、AR的錶達質粒、AR轉錄活性的報告質粒pMMTV-luc及內參照報告質粒pRL-SV40,併以雙氫睪酮刺激後,以Promega的雙報告基兇分析試劑盒測定AR的轉錄活性.最後,利用共聚焦顯微技術分析LNCaP細胞中內源性的PKD3和AR在有無雙氫睪酮刺激時亞細胞定位的變化和可能的共定位.結果 在LNCaP細胞中,過錶達PKD3可明顯升高雙氫睪酮刺激時PSA的mRNA錶達水平(P<0.001).與之相符,在HEK293細胞中,過錶達PKD3明顯提高雙氫睪酮刺激時AR的轉錄活性(P<0.001),而過錶達無激酶活性的PKD3可部分降低AR的轉錄活性(P<0.01).此外,LNCaP細胞中內源性的PKD3和AR在雙氫睪酮刺激時均嚮覈內轉位併共定位于覈內.結論 PKD3增彊雙氫睪酮刺激的前列腺癌細胞中AR的轉錄活性及上調PSA的錶達,提示PKD3可能參與雄激素依賴的前列腺細胞的生長和噁性增殖.
목적 연구단백격매D3(PKD3)대전렬선암세포중전렬선특이성항원(PSA)표체수평적영향급기궤제,이기천명PKD3재웅격소의뢰적전렬선암세포증식중적중요작용.방법 수선,재LNCaP세포중과표체PKD3병이쌍경고동자격,이후채용형광정량PCR확증PSA적cDNA병사용2-△△α방법비교기상대표체량적변화;기차,재HEK293세포중,공전염PKD3적야생형질립(혹무격매활성적돌변형질립)、AR적표체질립、AR전록활성적보고질립pMMTV-luc급내삼조보고질립pRL-SV40,병이쌍경역동자격후,이Promega적쌍보고기흉분석시제합측정AR적전록활성.최후,이용공취초현미기술분석LNCaP세포중내원성적PKD3화AR재유무쌍경고동자격시아세포정위적변화화가능적공정위.결과 재LNCaP세포중,과표체PKD3가명현승고쌍경고동자격시PSA적mRNA표체수평(P<0.001).여지상부,재HEK293세포중,과표체PKD3명현제고쌍경고동자격시AR적전록활성(P<0.001),이과표체무격매활성적PKD3가부분강저AR적전록활성(P<0.01).차외,LNCaP세포중내원성적PKD3화AR재쌍경고동자격시균향핵내전위병공정위우핵내.결론 PKD3증강쌍경고동자격적전렬선암세포중AR적전록활성급상조PSA적표체,제시PKD3가능삼여웅격소의뢰적전렬선세포적생장화악성증식.
