胃肠病学和肝病学杂志
胃腸病學和肝病學雜誌
위장병학화간병학잡지
CHINESE JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY AND HEPATOLOGY
2011年
4期
316-319
,共4页
周威%杜雅菊%吕志武%肖凡%李学永%魏红莲%成军%魏红山
週威%杜雅菊%呂誌武%肖凡%李學永%魏紅蓮%成軍%魏紅山
주위%두아국%려지무%초범%리학영%위홍련%성군%위홍산
肝纤维化%C16orf54%克隆%多克隆抗体
肝纖維化%C16orf54%剋隆%多剋隆抗體
간섬유화%C16orf54%극륭%다극륭항체
目的 制备人类功能未知基因C16orf54重组蛋白的多克隆抗体,为该基因功能研究奠定基础.方法 分离纯化LX2细胞的总RNA,逆转录为cDNA,PCR扩增C16orf54基因的目的片段,构建重组蛋白表达质粒,转化大肠杆菌BL21,制备C16orf54重组蛋白.鉴定表达正确后,利用纯化的C16orf54重组蛋白免疫新西兰大白兔,获得抗C16orf54重组蛋白的多克隆抗体.利用制备的多克隆抗体,采用免疫组织化学技术观察该蛋白在肝细胞内的表达特征.结果 Western blot及生物质谱技术分析证实,重组蛋白表达正确.所制备的多克隆抗体效价＞1:320 000,Western blot分析显示,多克隆抗体的特异性良好.免疫组织化学分析显示,该蛋白主要表达于肝实质细胞周围,呈膜型和浆型分布;胃黏膜下组织细胞弱表达.结论 C16orf54多克隆抗体被成功制备.C16orf54主要表达于肝实质细胞周围及胃黏膜下基底层细胞.
目的 製備人類功能未知基因C16orf54重組蛋白的多剋隆抗體,為該基因功能研究奠定基礎.方法 分離純化LX2細胞的總RNA,逆轉錄為cDNA,PCR擴增C16orf54基因的目的片段,構建重組蛋白錶達質粒,轉化大腸桿菌BL21,製備C16orf54重組蛋白.鑒定錶達正確後,利用純化的C16orf54重組蛋白免疫新西蘭大白兔,穫得抗C16orf54重組蛋白的多剋隆抗體.利用製備的多剋隆抗體,採用免疫組織化學技術觀察該蛋白在肝細胞內的錶達特徵.結果 Western blot及生物質譜技術分析證實,重組蛋白錶達正確.所製備的多剋隆抗體效價＞1:320 000,Western blot分析顯示,多剋隆抗體的特異性良好.免疫組織化學分析顯示,該蛋白主要錶達于肝實質細胞週圍,呈膜型和漿型分佈;胃黏膜下組織細胞弱錶達.結論 C16orf54多剋隆抗體被成功製備.C16orf54主要錶達于肝實質細胞週圍及胃黏膜下基底層細胞.
목적 제비인류공능미지기인C16orf54중조단백적다극륭항체,위해기인공능연구전정기출.방법 분리순화LX2세포적총RNA,역전록위cDNA,PCR확증C16orf54기인적목적편단,구건중조단백표체질립,전화대장간균BL21,제비C16orf54중조단백.감정표체정학후,이용순화적C16orf54중조단백면역신서란대백토,획득항C16orf54중조단백적다극륭항체.이용제비적다극륭항체,채용면역조직화학기술관찰해단백재간세포내적표체특정.결과 Western blot급생물질보기술분석증실,중조단백표체정학.소제비적다극륭항체효개＞1:320 000,Western blot분석현시,다극륭항체적특이성량호.면역조직화학분석현시,해단백주요표체우간실질세포주위,정막형화장형분포;위점막하조직세포약표체.결론 C16orf54다극륭항체피성공제비.C16orf54주요표체우간실질세포주위급위점막하기저층세포.
