西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2012年
5期
593-597,616
,共6页
周熙惠%惠智艳%史瑞明%高锦伟%梁潇%李溪%肖丹丹
週熙惠%惠智豔%史瑞明%高錦偉%樑瀟%李溪%肖丹丹
주희혜%혜지염%사서명%고금위%량소%리계%초단단
钠通道%SCN5A%心脏传导阻滞%膜片钳%基因突变%基因表达载体
鈉通道%SCN5A%心髒傳導阻滯%膜片鉗%基因突變%基因錶達載體
납통도%SCN5A%심장전도조체%막편겸%기인돌변%기인표체재체
目的 对作者发现的一个中国3代人心脏传导阻滞家系SCN5A基因新突变L1001Q,构建突变表达载体,利用分子生物学方法和全细胞膜片钳技术观察L1001Q突变的功能.方法 一步定点诱变法构建pEGFP-L1001QSCN5A突变体;激光共聚焦和Western blotting技术检测突变蛋白定位和表达;全细胞膜片钳技术观察突变体钠电流.结果 野生型和L1001Q突变均表达在细胞膜上,且表达量无明显变化.二者最大激活电流分别为(148.34±0.77) pA/pF和(132.59±0.96)pA/pF(P＞0.05),L1001Q突变半失活电压V1/2为(-73.25±0.87)mV,较野生型正向转移约3.5 mV[V1/2为(-76.71±0.73)mV,P＜0.05],L1001Q突变失活后恢复时间常数较野生型稍减小,差异无统计学意义(WT tau=16.8 ms,L1001Qtau=14.1ms,P＞0.05).结论 L1001Q突变未影响钠通道蛋白的表达和转运,主要通过改变钠通道门控特性引起钠通道功能减弱进而导致心脏传导阻滞.
目的 對作者髮現的一箇中國3代人心髒傳導阻滯傢繫SCN5A基因新突變L1001Q,構建突變錶達載體,利用分子生物學方法和全細胞膜片鉗技術觀察L1001Q突變的功能.方法 一步定點誘變法構建pEGFP-L1001QSCN5A突變體;激光共聚焦和Western blotting技術檢測突變蛋白定位和錶達;全細胞膜片鉗技術觀察突變體鈉電流.結果 野生型和L1001Q突變均錶達在細胞膜上,且錶達量無明顯變化.二者最大激活電流分彆為(148.34±0.77) pA/pF和(132.59±0.96)pA/pF(P＞0.05),L1001Q突變半失活電壓V1/2為(-73.25±0.87)mV,較野生型正嚮轉移約3.5 mV[V1/2為(-76.71±0.73)mV,P＜0.05],L1001Q突變失活後恢複時間常數較野生型稍減小,差異無統計學意義(WT tau=16.8 ms,L1001Qtau=14.1ms,P＞0.05).結論 L1001Q突變未影響鈉通道蛋白的錶達和轉運,主要通過改變鈉通道門控特性引起鈉通道功能減弱進而導緻心髒傳導阻滯.
목적 대작자발현적일개중국3대인심장전도조체가계SCN5A기인신돌변L1001Q,구건돌변표체재체,이용분자생물학방법화전세포막편겸기술관찰L1001Q돌변적공능.방법 일보정점유변법구건pEGFP-L1001QSCN5A돌변체;격광공취초화Western blotting기술검측돌변단백정위화표체;전세포막편겸기술관찰돌변체납전류.결과 야생형화L1001Q돌변균표체재세포막상,차표체량무명현변화.이자최대격활전류분별위(148.34±0.77) pA/pF화(132.59±0.96)pA/pF(P＞0.05),L1001Q돌변반실활전압V1/2위(-73.25±0.87)mV,교야생형정향전이약3.5 mV[V1/2위(-76.71±0.73)mV,P＜0.05],L1001Q돌변실활후회복시간상수교야생형초감소,차이무통계학의의(WT tau=16.8 ms,L1001Qtau=14.1ms,P＞0.05).결론 L1001Q돌변미영향납통도단백적표체화전운,주요통과개변납통도문공특성인기납통도공능감약진이도치심장전도조체.
