暨南大学学报(自然科学与医学版)
暨南大學學報(自然科學與醫學版)
기남대학학보(자연과학여의학판)
JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2004年
4期
426-430
,共5页
王晓华%吉琼梅%吴朝霞%董文心
王曉華%吉瓊梅%吳朝霞%董文心
왕효화%길경매%오조하%동문심
人血管内皮生长因子%鸡胚绒毛尿囊膜%基因表达
人血管內皮生長因子%鷄胚絨毛尿囊膜%基因錶達
인혈관내피생장인자%계배융모뇨낭막%기인표체
目的:用基因工程的方法在大肠杆菌中诱导表达人血管内皮生长因子(VEGF),分离纯化并检测其生物学活性,以研究其在药学领域潜在的药用价值.方法:利用PCR技术扩增VEGF基因片段,克隆到pQE30表达载体中,转化E.coli M15菌株后用IPTG进行诱导表达.经裂解细胞、变性、复性和Ni-NTA agarose金属螯合柱层析等方法纯化得到VEGF.用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成实验检测VEGF的生物活性.结果:重组表达质粒在大肠杆菌中成功地表达了相对分子质量为20 600的融合蛋白,它以不溶性的包涵体形式存在,占菌体总蛋白的30%左右.经分离纯化融合蛋白SDS-PAGE显示为单一区带.CAM结果表明给药组血管生成数(21.7±3.1、39.3±2.8) 与对照组(15.4±1.9、29.2±4.2)相比有明显增加(P<0.05).结论:利用原核表达系统得到血管内皮生长因子具有天然VEGF生物学活性,为进一步的应用研究奠定了基础.
目的:用基因工程的方法在大腸桿菌中誘導錶達人血管內皮生長因子(VEGF),分離純化併檢測其生物學活性,以研究其在藥學領域潛在的藥用價值.方法:利用PCR技術擴增VEGF基因片段,剋隆到pQE30錶達載體中,轉化E.coli M15菌株後用IPTG進行誘導錶達.經裂解細胞、變性、複性和Ni-NTA agarose金屬螯閤柱層析等方法純化得到VEGF.用鷄胚絨毛尿囊膜(CAM)血管生成實驗檢測VEGF的生物活性.結果:重組錶達質粒在大腸桿菌中成功地錶達瞭相對分子質量為20 600的融閤蛋白,它以不溶性的包涵體形式存在,佔菌體總蛋白的30%左右.經分離純化融閤蛋白SDS-PAGE顯示為單一區帶.CAM結果錶明給藥組血管生成數(21.7±3.1、39.3±2.8) 與對照組(15.4±1.9、29.2±4.2)相比有明顯增加(P<0.05).結論:利用原覈錶達繫統得到血管內皮生長因子具有天然VEGF生物學活性,為進一步的應用研究奠定瞭基礎.
목적:용기인공정적방법재대장간균중유도표체인혈관내피생장인자(VEGF),분리순화병검측기생물학활성,이연구기재약학영역잠재적약용개치.방법:이용PCR기술확증VEGF기인편단,극륭도pQE30표체재체중,전화E.coli M15균주후용IPTG진행유도표체.경렬해세포、변성、복성화Ni-NTA agarose금속오합주층석등방법순화득도VEGF.용계배융모뇨낭막(CAM)혈관생성실험검측VEGF적생물활성.결과:중조표체질립재대장간균중성공지표체료상대분자질량위20 600적융합단백,타이불용성적포함체형식존재,점균체총단백적30%좌우.경분리순화융합단백SDS-PAGE현시위단일구대.CAM결과표명급약조혈관생성수(21.7±3.1、39.3±2.8) 여대조조(15.4±1.9、29.2±4.2)상비유명현증가(P<0.05).결론:이용원핵표체계통득도혈관내피생장인자구유천연VEGF생물학활성,위진일보적응용연구전정료기출.
