中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2008年
6期
510-513
,共4页
赵凤玲%陈锦英%吕莉琨%杨东靖%李力
趙鳳玲%陳錦英%呂莉琨%楊東靖%李力
조봉령%진금영%려리곤%양동정%리력
汉坦病毒%重组核蛋白%鼠肺%间接免疫荧光
漢坦病毒%重組覈蛋白%鼠肺%間接免疫熒光
한탄병독%중조핵단백%서폐%간접면역형광
目的 纯化汉坦病毒(HV)SEO型L99株重组核蛋白(rNP),制备抗体用于鼠肺组织HV抗原的检测.方法 重组菌株E. Coli BL21(DE3)/pET32a-L99S经IPTG诱导表达rNP,采用Ni亲和层析方法纯化,纯化蛋白免疫日本大耳白兔,获取抗血清用于间接免疫荧光法(IFA)检测鼠肺组织的HV抗原;并与病人混合血清作为一抗的IFA结果进行比较,部分标本进一步用RT-PCR法进行验证.结果 rNP表达量占菌体总蛋白的52.2%,纯化蛋白的总回收率为22.9%;纯化蛋白Western blot分析为单带,纯度达95%以上,用其制备多克隆抗体滴度达1:512000.IFA检测59份鼠肺标本,用兔rNP抗体和病人混合血清作为一抗其阳性率分别为23.7%和16.9%;两者结果不一致的6份鼠肺经RT-PCR检测HV核酸,均与兔rNP抗体的IFA结果相一致.结论 采用rNP抗体进行IFA检测,可显著地提高鼠类HV感染监测的准确性,值得推广使用.
目的 純化漢坦病毒(HV)SEO型L99株重組覈蛋白(rNP),製備抗體用于鼠肺組織HV抗原的檢測.方法 重組菌株E. Coli BL21(DE3)/pET32a-L99S經IPTG誘導錶達rNP,採用Ni親和層析方法純化,純化蛋白免疫日本大耳白兔,穫取抗血清用于間接免疫熒光法(IFA)檢測鼠肺組織的HV抗原;併與病人混閤血清作為一抗的IFA結果進行比較,部分標本進一步用RT-PCR法進行驗證.結果 rNP錶達量佔菌體總蛋白的52.2%,純化蛋白的總迴收率為22.9%;純化蛋白Western blot分析為單帶,純度達95%以上,用其製備多剋隆抗體滴度達1:512000.IFA檢測59份鼠肺標本,用兔rNP抗體和病人混閤血清作為一抗其暘性率分彆為23.7%和16.9%;兩者結果不一緻的6份鼠肺經RT-PCR檢測HV覈痠,均與兔rNP抗體的IFA結果相一緻.結論 採用rNP抗體進行IFA檢測,可顯著地提高鼠類HV感染鑑測的準確性,值得推廣使用.
목적 순화한탄병독(HV)SEO형L99주중조핵단백(rNP),제비항체용우서폐조직HV항원적검측.방법 중조균주E. Coli BL21(DE3)/pET32a-L99S경IPTG유도표체rNP,채용Ni친화층석방법순화,순화단백면역일본대이백토,획취항혈청용우간접면역형광법(IFA)검측서폐조직적HV항원;병여병인혼합혈청작위일항적IFA결과진행비교,부분표본진일보용RT-PCR법진행험증.결과 rNP표체량점균체총단백적52.2%,순화단백적총회수솔위22.9%;순화단백Western blot분석위단대,순도체95%이상,용기제비다극륭항체적도체1:512000.IFA검측59빈서폐표본,용토rNP항체화병인혼합혈청작위일항기양성솔분별위23.7%화16.9%;량자결과불일치적6빈서폐경RT-PCR검측HV핵산,균여토rNP항체적IFA결과상일치.결론 채용rNP항체진행IFA검측,가현저지제고서류HV감염감측적준학성,치득추엄사용.
