河南科技大学学报（自然科学版）
河南科技大學學報（自然科學版）
하남과기대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF HENAN UNIVERSITY OF SCIENCE & TECHNOLOGY(NATURAL SCIENCE)
2010年
3期
74-78
,共5页
丁轲%余祖华%张春杰%程相朝%刘一尘%王臣
丁軻%餘祖華%張春傑%程相朝%劉一塵%王臣
정가%여조화%장춘걸%정상조%류일진%왕신
重叠延伸PCR%鸡IL-2%IBDV VP2%融合表达%毕赤酵母
重疊延伸PCR%鷄IL-2%IBDV VP2%融閤錶達%畢赤酵母
중첩연신PCR%계IL-2%IBDV VP2%융합표체%필적효모
通过重叠延伸PCR扩增IL2-VP2串联基因,克隆到pMD18-T载体上,亚克隆正向插入到毕赤酵母表达质粒pPICZαA中,经PCR和双酶切鉴定表明成功构建了酵母重组表达载体 pPICZαA-IL2-VP2.将该重组质粒线性化后电击转化入感受态毕赤酵母X-33菌株,构建成分泌型表达IL2-VP2的酵母工程菌株.经甲醇诱导后,通过SDS-PAGE、Western-blot活性检测分析表明IL2-VP2基因长度为1.85 kb,包含缺失了TAA终止密码子的IL-2基因和缺失了ATG起始密码子的VP2基因,两个基因之间以高度柔韧性的(Gly-Gly-Gly-Ser)编码核苷酸相连接,并在该体系中得到分泌表达,分子量约为50 kD,且表达产物对传染性法囊病毒具有较好的反应原性.
通過重疊延伸PCR擴增IL2-VP2串聯基因,剋隆到pMD18-T載體上,亞剋隆正嚮插入到畢赤酵母錶達質粒pPICZαA中,經PCR和雙酶切鑒定錶明成功構建瞭酵母重組錶達載體 pPICZαA-IL2-VP2.將該重組質粒線性化後電擊轉化入感受態畢赤酵母X-33菌株,構建成分泌型錶達IL2-VP2的酵母工程菌株.經甲醇誘導後,通過SDS-PAGE、Western-blot活性檢測分析錶明IL2-VP2基因長度為1.85 kb,包含缺失瞭TAA終止密碼子的IL-2基因和缺失瞭ATG起始密碼子的VP2基因,兩箇基因之間以高度柔韌性的(Gly-Gly-Gly-Ser)編碼覈苷痠相連接,併在該體繫中得到分泌錶達,分子量約為50 kD,且錶達產物對傳染性法囊病毒具有較好的反應原性.
통과중첩연신PCR확증IL2-VP2천련기인,극륭도pMD18-T재체상,아극륭정향삽입도필적효모표체질립pPICZαA중,경PCR화쌍매절감정표명성공구건료효모중조표체재체 pPICZαA-IL2-VP2.장해중조질립선성화후전격전화입감수태필적효모X-33균주,구건성분비형표체IL2-VP2적효모공정균주.경갑순유도후,통과SDS-PAGE、Western-blot활성검측분석표명IL2-VP2기인장도위1.85 kb,포함결실료TAA종지밀마자적IL-2기인화결실료ATG기시밀마자적VP2기인,량개기인지간이고도유인성적(Gly-Gly-Gly-Ser)편마핵감산상련접,병재해체계중득도분비표체,분자량약위50 kD,차표체산물대전염성법낭병독구유교호적반응원성.
