新疆农业科学
新疆農業科學
신강농업과학
XINJIANG AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
5期
980-985
,共6页
简子健%马素贞%孙其喆%沈炯玉%苗中秋%吕伟
簡子健%馬素貞%孫其喆%瀋炯玉%苗中鞦%呂偉
간자건%마소정%손기철%침형옥%묘중추%려위
牛双芽巴贝斯虫%热休克蛋白20%重组抗原间接ELISA%比对
牛雙芽巴貝斯蟲%熱休剋蛋白20%重組抗原間接ELISA%比對
우쌍아파패사충%열휴극단백20%중조항원간접ELISA%비대
[目的与方法]以纯化的牛双芽巴贝斯虫GST-HSP20(exons) 融合蛋白作为检测抗原,通过优化ELISA反应条件,建立了检测牛双芽巴贝斯虫血清特异性抗体的新型间接ELISA方法.[结果]方阵试验确定的GST-HSP20抗原的最适包被浓度为5 μg/mL,血清最佳稀释倍数为40倍,ELISA阳性反应的临界值为OD450≥0.292,批内和批间重复试验的变异系数均小于10%.HSP20间接ELISA方法能排除GST的干扰,与其它梨形虫病无交叉反应,与巢式PCR检测方法的阳性符合率为96%.[结论]所建立的ELSIA检测法重复性好、特异性强、灵敏度高.这是国内首次利用重组蛋白建立的牛双芽巴贝斯病血清学诊断方法,为大规模地进行牛巴贝斯虫病的流行病学调查和血清学诊断提供有效的技术手段.
[目的與方法]以純化的牛雙芽巴貝斯蟲GST-HSP20(exons) 融閤蛋白作為檢測抗原,通過優化ELISA反應條件,建立瞭檢測牛雙芽巴貝斯蟲血清特異性抗體的新型間接ELISA方法.[結果]方陣試驗確定的GST-HSP20抗原的最適包被濃度為5 μg/mL,血清最佳稀釋倍數為40倍,ELISA暘性反應的臨界值為OD450≥0.292,批內和批間重複試驗的變異繫數均小于10%.HSP20間接ELISA方法能排除GST的榦擾,與其它梨形蟲病無交扠反應,與巢式PCR檢測方法的暘性符閤率為96%.[結論]所建立的ELSIA檢測法重複性好、特異性彊、靈敏度高.這是國內首次利用重組蛋白建立的牛雙芽巴貝斯病血清學診斷方法,為大規模地進行牛巴貝斯蟲病的流行病學調查和血清學診斷提供有效的技術手段.
[목적여방법]이순화적우쌍아파패사충GST-HSP20(exons) 융합단백작위검측항원,통과우화ELISA반응조건,건립료검측우쌍아파패사충혈청특이성항체적신형간접ELISA방법.[결과]방진시험학정적GST-HSP20항원적최괄포피농도위5 μg/mL,혈청최가희석배수위40배,ELISA양성반응적림계치위OD450≥0.292,비내화비간중복시험적변이계수균소우10%.HSP20간접ELISA방법능배제GST적간우,여기타리형충병무교차반응,여소식PCR검측방법적양성부합솔위96%.[결론]소건립적ELSIA검측법중복성호、특이성강、령민도고.저시국내수차이용중조단백건립적우쌍아파패사병혈청학진단방법,위대규모지진행우파패사충병적류행병학조사화혈청학진단제공유효적기술수단.
