RNA干扰对MDA-MB-231乳腺癌细胞株骨保护素基因表达的抑制作用
RNA간우대MDA-MB-231유선암세포주골보호소기인표체적억제작용
Inhibitory effect of RNA interference on osteoprotegerin gene expression in MDA-MB-231 breast cancer cell line
  • 万方数据
    中华乳腺病杂志（电子版） 중화유선병잡지（전자판）
    CHINESE JOURNAL OF BREAST DISEASE(ELECTRONIC VERSION)
    2011年 2期 189-197 ,共9页

    张帆%唐振宁%杨新华%徐琰%范林军%张毅%陈莉%周艳%陈庆秋%姜军

    장범%당진저%양신화%서염%범림군%장의%진리%주염%진경추%강군

    乳腺肿瘤%骨保护素%RNA干扰%MDA-MB-231细胞 乳腺腫瘤%骨保護素%RNA榦擾%MDA-MB-231細胞
    유선종류%골보호소%RNA간우%MDA-MB-231세포
    目的 构建针对骨保护素(OPG)基因的一个载体编码三条短发夹RNA(shRNA)的真核表达质粒,观察其对MDA-MB-231乳腺癌细胞株OPG表达的抑制作用.方法 选择3个针对OPG基因的RNA干扰(RNAi)位点,分别设计合成3对编码相应shRNA的DNA单链,每对单链连接形成双链后分别与线性化载体pGenesil-1.1、pGenesil-1.2、pGenesil-1.3连接形成pGenesil-1.1-shRNA1、pGenesil-1.2-shRNA2、pGenesil-1.3-shRNA3,对以上重组载体反复酶切连接,构建成重组质pGenesil-1.1-1.2-1.3-shRNA1-shRNA2-shRNA3,酶切鉴定和测序无误后,将该质粒转染MDA-MB-231细胞,以G418加压筛选,对转染细胞行单克隆化,稳定转染细胞行RT-PCR和Western blot检测,确定其对OPG基因表达抑制作用.统计分析采用单因素方差分析和SLD分析法.结果 成功构建了pGenesil-1.1-1.2-1.3-shRNA1-shRNA2-shRNA3重组质粒;以该质粒稳定转染MDA-MB-231细胞后其OPG mRNA和蛋白表达均较对照差异有统计学意义(P＜0.05),RNAi对OPG mRNA和蛋白的表达抑制率分别为91%和73%.结论 本研究构建了针对OPG的一个载体编码3条shRNA的真核表达质粒,通过RNAi抑制了MDA-MB-231细胞OPG基因表达,为进一步深入探讨肿瘤细胞自身OPG表达在乳腺癌骨转移发生发展中的作用提供了相关实验基础.
    목적 구건침대골보호소(OPG)기인적일개재체편마삼조단발협RNA(shRNA)적진핵표체질립,관찰기대MDA-MB-231유선암세포주OPG표체적억제작용.방법 선택3개침대OPG기인적RNA간우(RNAi)위점,분별설계합성3대편마상응shRNA적DNA단련,매대단련련접형성쌍련후분별여선성화재체pGenesil-1.1、pGenesil-1.2、pGenesil-1.3련접형성pGenesil-1.1-shRNA1、pGenesil-1.2-shRNA2、pGenesil-1.3-shRNA3,대이상중조재체반복매절련접,구건성중조질pGenesil-1.1-1.2-1.3-shRNA1-shRNA2-shRNA3,매절감정화측서무오후,장해질립전염MDA-MB-231세포,이G418가압사선,대전염세포행단극륭화,은정전염세포행RT-PCR화Western blot검측,학정기대OPG기인표체억제작용.통계분석채용단인소방차분석화SLD분석법.결과 성공구건료pGenesil-1.1-1.2-1.3-shRNA1-shRNA2-shRNA3중조질립;이해질립은정전염MDA-MB-231세포후기OPG mRNA화단백표체균교대조차이유통계학의의(P＜0.05),RNAi대OPG mRNA화단백적표체억제솔분별위91%화73%.결론 본연구구건료침대OPG적일개재체편마3조shRNA적진핵표체질립,통과RNAi억제료MDA-MB-231세포OPG기인표체,위진일보심입탐토종류세포자신OPG표체재유선암골전이발생발전중적작용제공료상관실험기출.
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