CAJ | 학술논문

以红富士苹果(Malus domestica CV Red Fuji)浓红型芽变和其条红母株为试材,构建抑制性差减杂交(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)文库,差异筛选SSH-cDNA文库,经过大量测序构建成红富士苹果EST序列本地数据库,对本地数据库进行Blastn检淡,得到42条金属硫蛋白基因MdFjMT2的cDNA片段,通过序列拼接和逆转录PCR(RT-PCR)方法,获得了红富士苹果金属硫蛋白基因MdFjMT2全长cDNA序列(Gen-bank登录号为HQ730757),该基因全长684bp,其中5’非翻译区97bp,3’非翻译区347bp,编码区(Coding sequence,CDS)为240bp,编码79个氨基酸,推测蛋白分子量为7.7938kDa,理论等电点为4.75.该基因具有金属硫蛋白基因的典型结构域特征,编码的氨基酸序列中含有14个半胱氨酸残基Cys(C),Cys残基的排列特征是以CC、CXC和CXXC集中分布在肤链的N端和C端.系统进化分析表明MdFjMT2与砂梨(Pyrus pyrifolia)、苹果(Malus domestica)和小金海棠(M.xiaojinensis等植物金属硫蛋白具有较近的亲缘关系,与扁桃(Prunus dulcis)、旱柳(Salix matsudana)、美味猕猴桃(Actinidia deliciosa)等植物的亲缘关系较远.生物信息学分析结果表明,MdFjMT2主要位于叶绿体中,没有信号肽,是非跨膜亲水性蛋白,其蛋白质二级结构的主要元件是无规则卷曲,没有功能结构域.这些结果为MdFjMT2的结构与功能挖掘提供一定的参考.本研究结果有助于研究该基因在苹果着色中的作用,阐明苹果着色的分子机制.
이홍부사평과(Malus domestica CV Red Fuji)농홍형아변화기조홍모주위시재,구건억제성차감잡교(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)문고,차이사선SSH-cDNA문고,경과대량측서구건성홍부사평과EST서렬본지수거고,대본지수거고진행Blastn검담,득도42조금속류단백기인MdFjMT2적cDNA편단,통과서렬병접화역전록PCR(RT-PCR)방법,획득료홍부사평과금속류단백기인MdFjMT2전장cDNA서렬(Gen-bank등록호위HQ730757),해기인전장684bp,기중5’비번역구97bp,3’비번역구347bp,편마구(Coding sequence,CDS)위240bp,편마79개안기산,추측단백분자량위7.7938kDa,이론등전점위4.75.해기인구유금속류단백기인적전형결구역특정,편마적안기산서렬중함유14개반광안산잔기Cys(C),Cys잔기적배렬특정시이CC、CXC화CXXC집중분포재부련적N단화C단.계통진화분석표명MdFjMT2여사리(Pyrus pyrifolia)、평과(Malus domestica)화소금해당(M.xiaojinensis등식물금속류단백구유교근적친연관계,여편도(Prunus dulcis)、한류(Salix matsudana)、미미미후도(Actinidia deliciosa)등식물적친연관계교원.생물신식학분석결과표명,MdFjMT2주요위우협록체중,몰유신호태,시비과막친수성단백,기단백질이급결구적주요원건시무규칙권곡,몰유공능결구역.저사결과위MdFjMT2적결구여공능알굴제공일정적삼고.본연구결과유조우연구해기인재평과착색중적작용,천명평과착색적분자궤제.