中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2011年
11期
1016-1020
,共5页
刘碧源%曾庆仁%余平%杨胜辉%蔡力汀%周军%张顺科
劉碧源%曾慶仁%餘平%楊勝輝%蔡力汀%週軍%張順科
류벽원%증경인%여평%양성휘%채력정%주군%장순과
SV40LT基因%腺病毒载体%日本血吸虫%童虫细胞
SV40LT基因%腺病毒載體%日本血吸蟲%童蟲細胞
SV40LT기인%선병독재체%일본혈흡충%동충세포
目的 构建携带SV40LT基因的重组腺病毒表达载体,制备具有感染力的重组腺病毒,观察其转染日本血吸虫(Schistosoma ja ponicum,Sj)童虫细胞后的表达情况.方法 采用体外连接法构建好的携带SV40LT基因的重组腺病毒质粒(AdHu5-SV40LT)转化Stbl2感受态菌,获得重组腺病毒质粒后,经Pac Ⅰ酶切线性化后转染293A细胞,获得出重组腺病毒(AdHu5-SV40LT).将重组腺病毒感染Sj童虫细胞,采用RT-PCR和免疫组织化学检测SV40LT基因的表达情况.结果 重组腺病毒载体质粒可转染293A细胞并可在293A细胞内进行有效的复制；提取病毒DNA进行PCR检测证实含有SV40LT目的基因.以重组腺病毒能感染Sj童虫细胞,经RT-PCR和免疫组化检测有SV40LT基因在细胞中的表达.结论 成功包装了具有感染能力的含SV40LT基因的重组腺病毒,感染Sj童虫细胞后目的基因有表达,为进一步探索日本血吸虫细胞永生化提供了实验依据.
目的 構建攜帶SV40LT基因的重組腺病毒錶達載體,製備具有感染力的重組腺病毒,觀察其轉染日本血吸蟲(Schistosoma ja ponicum,Sj)童蟲細胞後的錶達情況.方法 採用體外連接法構建好的攜帶SV40LT基因的重組腺病毒質粒(AdHu5-SV40LT)轉化Stbl2感受態菌,穫得重組腺病毒質粒後,經Pac Ⅰ酶切線性化後轉染293A細胞,穫得齣重組腺病毒(AdHu5-SV40LT).將重組腺病毒感染Sj童蟲細胞,採用RT-PCR和免疫組織化學檢測SV40LT基因的錶達情況.結果 重組腺病毒載體質粒可轉染293A細胞併可在293A細胞內進行有效的複製；提取病毒DNA進行PCR檢測證實含有SV40LT目的基因.以重組腺病毒能感染Sj童蟲細胞,經RT-PCR和免疫組化檢測有SV40LT基因在細胞中的錶達.結論 成功包裝瞭具有感染能力的含SV40LT基因的重組腺病毒,感染Sj童蟲細胞後目的基因有錶達,為進一步探索日本血吸蟲細胞永生化提供瞭實驗依據.
목적 구건휴대SV40LT기인적중조선병독표체재체,제비구유감염력적중조선병독,관찰기전염일본혈흡충(Schistosoma ja ponicum,Sj)동충세포후적표체정황.방법 채용체외련접법구건호적휴대SV40LT기인적중조선병독질립(AdHu5-SV40LT)전화Stbl2감수태균,획득중조선병독질립후,경Pac Ⅰ매절선성화후전염293A세포,획득출중조선병독(AdHu5-SV40LT).장중조선병독감염Sj동충세포,채용RT-PCR화면역조직화학검측SV40LT기인적표체정황.결과 중조선병독재체질립가전염293A세포병가재293A세포내진행유효적복제；제취병독DNA진행PCR검측증실함유SV40LT목적기인.이중조선병독능감염Sj동충세포,경RT-PCR화면역조화검측유SV40LT기인재세포중적표체.결론 성공포장료구유감염능력적함SV40LT기인적중조선병독,감염Sj동충세포후목적기인유표체,위진일보탐색일본혈흡충세포영생화제공료실험의거.
