首都医科大学学报
首都醫科大學學報
수도의과대학학보
JOURNAL OF CAPITAL UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES
2006年
5期
639-642
,共4页
云妙英%王涛%肖宇红%张京文%陈正华
雲妙英%王濤%肖宇紅%張京文%陳正華
운묘영%왕도%초우홍%장경문%진정화
人血清白蛋白基因%载体%序列鉴定
人血清白蛋白基因%載體%序列鑒定
인혈청백단백기인%재체%서렬감정
目的 构建重组人血清白蛋白(rHSA)表达基因的克隆载体及表达载体,为下一步的蛋白表达和构建rHSA融合基因打下基础.方法 从人胎盘中提取总RNA,利用RT-PCR方法构建cDNA-mRNA杂交链,然后用人血清白蛋白表达基因的特异引物进行PCR,PCR产物回收后与T载体连接,经过转化、质粒酶切、测序等一系列手段对插入情况和序列是否正确进行鉴定.用另一组带有酶切位点的引物和pfu酶进行PCR,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切PCR回收片段及pET28a表达载体,二者经过连接、转化、质粒酶切、测序等手段重新鉴定序列是否正确.结果 插入到T载体和pET28a载体中的序列为1 830 bp的带有24个氨基酸信号肽的基因片段,此序列和GenBank中公布的rHSA序列相一致,并显示在485、750、1 685等位点可能有等位基因多态性.结论 从胎盘中提取mRNA后,利用RT-PCR构建的人血清白蛋白基因序列完全正确,为下一步的工作提供了基础.
目的 構建重組人血清白蛋白(rHSA)錶達基因的剋隆載體及錶達載體,為下一步的蛋白錶達和構建rHSA融閤基因打下基礎.方法 從人胎盤中提取總RNA,利用RT-PCR方法構建cDNA-mRNA雜交鏈,然後用人血清白蛋白錶達基因的特異引物進行PCR,PCR產物迴收後與T載體連接,經過轉化、質粒酶切、測序等一繫列手段對插入情況和序列是否正確進行鑒定.用另一組帶有酶切位點的引物和pfu酶進行PCR,用EcoRⅠ和HindⅢ雙酶切PCR迴收片段及pET28a錶達載體,二者經過連接、轉化、質粒酶切、測序等手段重新鑒定序列是否正確.結果 插入到T載體和pET28a載體中的序列為1 830 bp的帶有24箇氨基痠信號肽的基因片段,此序列和GenBank中公佈的rHSA序列相一緻,併顯示在485、750、1 685等位點可能有等位基因多態性.結論 從胎盤中提取mRNA後,利用RT-PCR構建的人血清白蛋白基因序列完全正確,為下一步的工作提供瞭基礎.
목적 구건중조인혈청백단백(rHSA)표체기인적극륭재체급표체재체,위하일보적단백표체화구건rHSA융합기인타하기출.방법 종인태반중제취총RNA,이용RT-PCR방법구건cDNA-mRNA잡교련,연후용인혈청백단백표체기인적특이인물진행PCR,PCR산물회수후여T재체련접,경과전화、질립매절、측서등일계렬수단대삽입정황화서렬시부정학진행감정.용령일조대유매절위점적인물화pfu매진행PCR,용EcoRⅠ화HindⅢ쌍매절PCR회수편단급pET28a표체재체,이자경과련접、전화、질립매절、측서등수단중신감정서렬시부정학.결과 삽입도T재체화pET28a재체중적서렬위1 830 bp적대유24개안기산신호태적기인편단,차서렬화GenBank중공포적rHSA서렬상일치,병현시재485、750、1 685등위점가능유등위기인다태성.결론 종태반중제취mRNA후,이용RT-PCR구건적인혈청백단백기인서렬완전정학,위하일보적공작제공료기출.
