CAJ | 학술논문

目的:获得与H22肿瘤细胞特异性结合的aptamer.方法:利用SELEX技术,以小鼠DC细胞为反筛选细胞,以H22肿瘤细胞为靶细胞,从体外合成的80bp随机单链DNA文库中筛选出能与H22肿瘤细胞特异结合的aptamer.采用荧光标记引物法检测aptamer与H22肿瘤细胞的亲和力.所获得的aptamer采用MACAW v2.05软件进行aptamer序列的一级结构同源序列比较,用DNASIS v2.5软件计算分析序列最低二级结构能量值,获得其二级结构模拟图.结果:本实验设计的文库序列:5'-CGTCGCTGCACATTCCG-N46-CGCACAGCTGGGA GTAC-3'具有较高的扩增效率,适合于aptamer与以细胞为靶物质的筛选.经过11轮循环筛选,随机单链DNA文库与靶细胞结合的荧光强度从1%上升到59%,结合曲线进入平台期,表明结合已基本处于稳定状态,因此可以判断aptamer与靶细胞的结合基本已经处于饱和状态.对所获得的32个aptamer进行测序,然后进行一级结构和二级结构分析.一级结构分析获得5个保守序列:AGGGA、AGAAGG、GTGAXAA、ATAGT、CAAGG,其余10个aptamer无同源序列.二级结构分析表明,aptamer形成的茎环、凸环结构可能是与H22肿瘤细胞特异性结合的结构基础.亲和力检测结果表明第24号aptamer具有最强的亲和力.结论:利用随机单链寡核苷酸文库成功获得与H22肿瘤细胞特异结合的aptamer,其一级和二级结构与亲和力密切相关.
목적:획득여H22종류세포특이성결합적aptamer.방법:이용SELEX기술,이소서DC세포위반사선세포,이H22종류세포위파세포,종체외합성적80bp수궤단련DNA문고중사선출능여H22종류세포특이결합적aptamer.채용형광표기인물법검측aptamer여H22종류세포적친화력.소획득적aptamer채용MACAW v2.05연건진행aptamer서렬적일급결구동원서렬비교,용DNASIS v2.5연건계산분석서렬최저이급결구능량치,획득기이급결구모의도.결과:본실험설계적문고서렬:5'-CGTCGCTGCACATTCCG-N46-CGCACAGCTGGGA GTAC-3'구유교고적확증효솔,괄합우aptamer여이세포위파물질적사선.경과11륜순배사선,수궤단련DNA문고여파세포결합적형광강도종1%상승도59%,결합곡선진입평태기,표명결합이기본처우은정상태,인차가이판단aptamer여파세포적결합기본이경처우포화상태.대소획득적32개aptamer진행측서,연후진행일급결구화이급결구분석.일급결구분석획득5개보수서렬:AGGGA、AGAAGG、GTGAXAA、ATAGT、CAAGG,기여10개aptamer무동원서렬.이급결구분석표명,aptamer형성적경배、철배결구가능시여H22종류세포특이성결합적결구기출.친화력검측결과표명제24호aptamer구유최강적친화력.결론:이용수궤단련과핵감산문고성공획득여H22종류세포특이결합적aptamer,기일급화이급결구여친화력밀절상관.