CAJ | 학술논문

从感染软腐病的胡萝卜组织中分离出胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜亚种(Erwinia carotovora subsp.carotovora)CSSY002菌株.用该菌株接种非寄主植物烟草不能引起过敏反应.构建CSSY002菌株的基因组文库,应用α-P32标记的hrpN基因作探针,通过菌落原位杂交技术从该文库中筛选到1.5～2.0 kb的hrpN-like阳性克隆,进一步将该片段亚克隆到pBluescript-Ⅱ SK(+)载体中,进行核苷酸序列测定.结果表明,hrpN-like基因(即hrpNCSSY002基因)的开放阅读框(ORF)为1 071 bp,其核苷酸序列已在Genbank注册,登录号为bankit AY999002.hrpN-like基因的编码产物Harpin-like蛋白(即HarpinCSSY002蛋白)由356个氨基酸残基组成,分子量为36.64×103,等电点pI 5.9.将hrpN-like基因构建到表达质粒pET-28a(+)的T7强启动子下,并转化到大肠杆菌工程菌JM109(DE3)细胞中,经IPTG(异丙基硫代-β-D半乳糖苷)诱导获得Harpin-like蛋白的高效表达,并通过接种烟草叶片的过敏反应检测Harpin-like蛋白的生物学活性.图5参16
종감염연부병적호라복조직중분리출호라복연부구문씨균호라복아충(Erwinia carotovora subsp.carotovora)CSSY002균주.용해균주접충비기주식물연초불능인기과민반응.구건CSSY002균주적기인조문고,응용α-P32표기적hrpN기인작탐침,통과균락원위잡교기술종해문고중사선도1.5～2.0 kb적hrpN-like양성극륭,진일보장해편단아극륭도pBluescript-Ⅱ SK(+)재체중,진행핵감산서렬측정.결과표명,hrpN-like기인(즉hrpNCSSY002기인)적개방열독광(ORF)위1 071 bp,기핵감산서렬이재Genbank주책,등록호위bankit AY999002.hrpN-like기인적편마산물Harpin-like단백(즉HarpinCSSY002단백)유356개안기산잔기조성,분자량위36.64×103,등전점pI 5.9.장hrpN-like기인구건도표체질립pET-28a(+)적T7강계동자하,병전화도대장간균공정균JM109(DE3)세포중,경IPTG(이병기류대-β-D반유당감)유도획득Harpin-like단백적고효표체,병통과접충연초협편적과민반응검측Harpin-like단백적생물학활성.도5삼16