中华老年心脑血管病杂志
中華老年心腦血管病雜誌
중화노년심뇌혈관병잡지
CHINESE JOURNAL OF GERIATRIC CARDIOVASCULAR AND CEREBROVASCULAR DISEASES
2007年
4期
262-265
,共4页
聂凌%祝善俊%于林君%宋熔%王江%田颖
聶凌%祝善俊%于林君%宋鎔%王江%田穎
섭릉%축선준%우림군%송용%왕강%전영
心内膜心肌纤维化症%磷酸单脂水解酶类%细胞凋亡%基因表达%转染
心內膜心肌纖維化癥%燐痠單脂水解酶類%細胞凋亡%基因錶達%轉染
심내막심기섬유화증%린산단지수해매류%세포조망%기인표체%전염
目的 将携带有张力蛋白同源物基因(PTEN)的重组腺病毒载体转染乳鼠心脏成纤维细胞,观察心脏成纤维细胞过度表达野生型PTEN对其增殖的影响.方法 分离培养心脏成纤维细胞,以携带有绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒Ad-PTEN转染上述细胞,荧光倒置显微镜下观察GFP表达情况,确定最佳感染倍数(MOI).原代心脏成纤维细胞接种至96孔板,转染Ad-PTEN[Ad-PTEN转染组(MOI根据生长曲线确定)],并设正常对照组(加入等体积培养基),以MTT的方法检测其吸光度(A),以反映细胞增殖情况,将转染效率达到90%以上成纤维细胞及正常对数生长期成纤维细胞消化,制成单细胞悬液,流式细胞仪分别检测细胞周期,以吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)法分别检测Ad-PTEN转染组和正常对照组细胞凋亡情况;结果 MTT测定的结果:48 h后Ad-PTEN转染组的A显著低于该时间点正常对照组(P＜0.05).流式细胞仪检测结果发现Ad-PTEN转染的成纤维细胞出现G1期阻滞;AO/EB法检测发现Ad-PTEN转染的成纤维细胞其细胞凋亡率与正常对照组细胞无显著差异;结论 PTEN基因过度表达将引起乳鼠心脏成纤维细胞增殖受抑制,该现象与细胞周期G1期阻滞有关.
目的 將攜帶有張力蛋白同源物基因(PTEN)的重組腺病毒載體轉染乳鼠心髒成纖維細胞,觀察心髒成纖維細胞過度錶達野生型PTEN對其增殖的影響.方法 分離培養心髒成纖維細胞,以攜帶有綠色熒光蛋白(GFP)的重組腺病毒Ad-PTEN轉染上述細胞,熒光倒置顯微鏡下觀察GFP錶達情況,確定最佳感染倍數(MOI).原代心髒成纖維細胞接種至96孔闆,轉染Ad-PTEN[Ad-PTEN轉染組(MOI根據生長麯線確定)],併設正常對照組(加入等體積培養基),以MTT的方法檢測其吸光度(A),以反映細胞增殖情況,將轉染效率達到90%以上成纖維細胞及正常對數生長期成纖維細胞消化,製成單細胞懸液,流式細胞儀分彆檢測細胞週期,以吖啶橙/溴乙錠(AO/EB)法分彆檢測Ad-PTEN轉染組和正常對照組細胞凋亡情況;結果 MTT測定的結果:48 h後Ad-PTEN轉染組的A顯著低于該時間點正常對照組(P＜0.05).流式細胞儀檢測結果髮現Ad-PTEN轉染的成纖維細胞齣現G1期阻滯;AO/EB法檢測髮現Ad-PTEN轉染的成纖維細胞其細胞凋亡率與正常對照組細胞無顯著差異;結論 PTEN基因過度錶達將引起乳鼠心髒成纖維細胞增殖受抑製,該現象與細胞週期G1期阻滯有關.
목적 장휴대유장력단백동원물기인(PTEN)적중조선병독재체전염유서심장성섬유세포,관찰심장성섬유세포과도표체야생형PTEN대기증식적영향.방법 분리배양심장성섬유세포,이휴대유록색형광단백(GFP)적중조선병독Ad-PTEN전염상술세포,형광도치현미경하관찰GFP표체정황,학정최가감염배수(MOI).원대심장성섬유세포접충지96공판,전염Ad-PTEN[Ad-PTEN전염조(MOI근거생장곡선학정)],병설정상대조조(가입등체적배양기),이MTT적방법검측기흡광도(A),이반영세포증식정황,장전염효솔체도90%이상성섬유세포급정상대수생장기성섬유세포소화,제성단세포현액,류식세포의분별검측세포주기,이아정등/추을정(AO/EB)법분별검측Ad-PTEN전염조화정상대조조세포조망정황;결과 MTT측정적결과:48 h후Ad-PTEN전염조적A현저저우해시간점정상대조조(P＜0.05).류식세포의검측결과발현Ad-PTEN전염적성섬유세포출현G1기조체;AO/EB법검측발현Ad-PTEN전염적성섬유세포기세포조망솔여정상대조조세포무현저차이;결론 PTEN기인과도표체장인기유서심장성섬유세포증식수억제,해현상여세포주기G1기조체유관.
