东北林业大学学报
東北林業大學學報
동북임업대학학보
JOURNAL OF NORTHEAST FORESTRY UNIVERSITY
2007年
6期
39-41
,共3页
水貂阿留申病毒%VP2基因%抗原表位%原核表达
水貂阿留申病毒%VP2基因%抗原錶位%原覈錶達
수초아류신병독%VP2기인%항원표위%원핵표체
根据GenBank中已发表的水貂阿留申病毒(ADV)VP2基因核苷酸序列分别设计合成两对引物,用PCR方法扩增ADV国内分离株VP2基因中主要抗原表位区的两个片段,分别将其克隆到原核表达载体pMAL-c2的多克隆位点中.经酶切、PCR扩增和测序分析证实其已正确插入到表达载体中,且阅读框是正确的,构建原核表达载体pMAL-VPa和pMAL-VPb.阳性重组质粒转化宿主菌TB1,用IPTG进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE检测和免疫印迹分析.结果表明两段蛋白均获得了表达,表达产物的分子质量分别约为63、65kD,与理论推测的分子质量一致;并在终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导下,4 h时其表达量达到高峰;Western blot分析表明表达蛋白能被兔抗MBP抗体所识别,具有一定的抗原性.
根據GenBank中已髮錶的水貂阿留申病毒(ADV)VP2基因覈苷痠序列分彆設計閤成兩對引物,用PCR方法擴增ADV國內分離株VP2基因中主要抗原錶位區的兩箇片段,分彆將其剋隆到原覈錶達載體pMAL-c2的多剋隆位點中.經酶切、PCR擴增和測序分析證實其已正確插入到錶達載體中,且閱讀框是正確的,構建原覈錶達載體pMAL-VPa和pMAL-VPb.暘性重組質粒轉化宿主菌TB1,用IPTG進行誘導錶達,對錶達產物進行SDS-PAGE檢測和免疫印跡分析.結果錶明兩段蛋白均穫得瞭錶達,錶達產物的分子質量分彆約為63、65kD,與理論推測的分子質量一緻;併在終濃度為1 mmol/L的IPTG誘導下,4 h時其錶達量達到高峰;Western blot分析錶明錶達蛋白能被兔抗MBP抗體所識彆,具有一定的抗原性.
근거GenBank중이발표적수초아류신병독(ADV)VP2기인핵감산서렬분별설계합성량대인물,용PCR방법확증ADV국내분리주VP2기인중주요항원표위구적량개편단,분별장기극륭도원핵표체재체pMAL-c2적다극륭위점중.경매절、PCR확증화측서분석증실기이정학삽입도표체재체중,차열독광시정학적,구건원핵표체재체pMAL-VPa화pMAL-VPb.양성중조질립전화숙주균TB1,용IPTG진행유도표체,대표체산물진행SDS-PAGE검측화면역인적분석.결과표명량단단백균획득료표체,표체산물적분자질량분별약위63、65kD,여이론추측적분자질량일치;병재종농도위1 mmol/L적IPTG유도하,4 h시기표체량체도고봉;Western blot분석표명표체단백능피토항MBP항체소식별,구유일정적항원성.
