CAJ | 학술논문

目的研究B、C基因型乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对多药耐药基因1(MDR1)反式激活能力的差别.方法 PCR扩增B、C基因型HBV X基因并克隆于pcDNA3.1/HisC载体(重组载体分别为pcDNA3.1/HisC-XB及pcDNA3.1/HisC-XC).以FuGENE6将重组表达载体转染HepG2细胞,采用融合表达的X-press多肽表位抗体,通过Western blot检测目的蛋白在不同时间段的表达.PCR扩增MDR1基因启动子并克隆于萤火虫荧光素酶报告载体pGL3-Basic(重组载体为pGL-MDR).pGL-MDR分别与pcDNA3.1/His-GXB或pcDNA3.1/HisC-XC共转染HepG2细胞,转染后48 h裂解细胞并检测胞内萤火虫荧光素酶活性.实验数据以SPSS 11.5软件分析.结果成功克隆X蛋白表达载体及MDR1报告载体.Western blot显示pcDNA3.1/HisC-XB或pcDNA3.1/HisC-XC在HepG2细胞中均能表达HBV X蛋白,以转染后48 h为最高.当pGL-MDR报告质粒与X基因重组载体或空载体质量比在1∶2～1∶4范围内,萤火虫荧光素酶在各转染细胞内的活性依次为pcDNA3.1/HisC-XB+pGL-MDR组＞pcDNA3.1/HisC-XC+pGL-MDR组＞pcDNA3.1/HisC+pGL-MDR组(对照组),且存在剂量-效应关系.结论 B、C基因型HBV X蛋白对多药耐药基因均有反式激活能力,且B基因型强于C基因型.
목적 연구B、C기인형을형간염병독(HBV)X단백대다약내약기인1(MDR1)반식격활능력적차별.방법 PCR확증B、C기인형HBV X기인병극륭우pcDNA3.1/HisC재체(중조재체분별위pcDNA3.1/HisC-XB급pcDNA3.1/HisC-XC).이FuGENE6장중조표체재체전염HepG2세포,채용융합표체적X-press다태표위항체,통과Western blot검측목적 단백재불동시간단적표체.PCR확증MDR1기인계동자병극륭우형화충형광소매보고재체pGL3-Basic(중조재체위pGL-MDR).pGL-MDR분별여pcDNA3.1/His-GXB혹pcDNA3.1/HisC-XC공전염HepG2세포,전염후48 h렬해세포병검측포내형화충형광소매활성.실험수거이SPSS 11.5연건분석.결과 성공극륭X단백표체재체급MDR1보고재체.Western blot현시pcDNA3.1/HisC-XB혹pcDNA3.1/HisC-XC재HepG2세포중균능표체HBV X단백,이전염후48 h위최고.당pGL-MDR보고질립여X기인중조재체혹공재체질량비재1∶2～1∶4범위내,형화충형광소매재각전염세포내적활성의차위pcDNA3.1/HisC-XB+pGL-MDR조＞pcDNA3.1/HisC-XC+pGL-MDR조＞pcDNA3.1/HisC+pGL-MDR조(대조조),차존재제량-효응관계.결론 B、C기인형HBV X단백대다약내약기인균유반식격활능력,차B기인형강우C기인형.