现代免疫学
現代免疫學
현대면역학
CURRENT IMMUNOLOGY
2008年
2期
110-115
,共6页
王媛媛%韩红辉%杜冰%钱旻
王媛媛%韓紅輝%杜冰%錢旻
왕원원%한홍휘%두빙%전민
肝癌特异性结合肽%蜂毒肽%免疫毒素%表达%纯化
肝癌特異性結閤肽%蜂毒肽%免疫毒素%錶達%純化
간암특이성결합태%봉독태%면역독소%표체%순화
从噬菌体随机肽库中筛选获得了与肝癌细胞特异性结合的12-肽 A54,将其与蜂毒肽(melittin,Mel)编码基因连接后,插入质粒载体pET-32a(+)中,构建成A54-Mel与硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)及六聚组氨酸(6×His)的融合表达载体pET32-A54-Mel.将重组质粒转化E.coli BL21(DE3)表达后,获得可溶性表达产物,经Western blot鉴定,表达产物能与蜂毒肽特异性抗体反应.表达菌经超声裂解后,上清液用Ni+离子亲和层析法纯化得到了融合蛋白(Trx-A54-Mel),经肠激酶裂解、再次Ni+离子亲和层析后得到纯度大于95%的肝癌特异性免疫毒素A54-Mel.经细胞ELISA和四氮唑盐(MTT)法检测,发现A54-Mel在体外具有一定的肿瘤细胞特异性靶向及杀伤活性,为新型免疫毒素在肝癌靶向治疗中的研究奠定了基础.
從噬菌體隨機肽庫中篩選穫得瞭與肝癌細胞特異性結閤的12-肽 A54,將其與蜂毒肽(melittin,Mel)編碼基因連接後,插入質粒載體pET-32a(+)中,構建成A54-Mel與硫氧還蛋白(thioredoxin,Trx)及六聚組氨痠(6×His)的融閤錶達載體pET32-A54-Mel.將重組質粒轉化E.coli BL21(DE3)錶達後,穫得可溶性錶達產物,經Western blot鑒定,錶達產物能與蜂毒肽特異性抗體反應.錶達菌經超聲裂解後,上清液用Ni+離子親和層析法純化得到瞭融閤蛋白(Trx-A54-Mel),經腸激酶裂解、再次Ni+離子親和層析後得到純度大于95%的肝癌特異性免疫毒素A54-Mel.經細胞ELISA和四氮唑鹽(MTT)法檢測,髮現A54-Mel在體外具有一定的腫瘤細胞特異性靶嚮及殺傷活性,為新型免疫毒素在肝癌靶嚮治療中的研究奠定瞭基礎.
종서균체수궤태고중사선획득료여간암세포특이성결합적12-태 A54,장기여봉독태(melittin,Mel)편마기인련접후,삽입질립재체pET-32a(+)중,구건성A54-Mel여류양환단백(thioredoxin,Trx)급륙취조안산(6×His)적융합표체재체pET32-A54-Mel.장중조질립전화E.coli BL21(DE3)표체후,획득가용성표체산물,경Western blot감정,표체산물능여봉독태특이성항체반응.표체균경초성렬해후,상청액용Ni+리자친화층석법순화득도료융합단백(Trx-A54-Mel),경장격매렬해、재차Ni+리자친화층석후득도순도대우95%적간암특이성면역독소A54-Mel.경세포ELISA화사담서염(MTT)법검측,발현A54-Mel재체외구유일정적종류세포특이성파향급살상활성,위신형면역독소재간암파향치료중적연구전정료기출.
