细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
10期
950-953
,共4页
严玉兰%刘洋%曹文雁%步雪峰%步志高%郑金旭
嚴玉蘭%劉洋%曹文雁%步雪峰%步誌高%鄭金旭
엄옥란%류양%조문안%보설봉%보지고%정금욱
干扰素λ%基因转染%生物活性
榦擾素λ%基因轉染%生物活性
간우소λ%기인전염%생물활성
目的:研究HuIFN-λ1和HuIFN-λ2真核细胞重组表达及其生物学活性.方法:用水疱性口炎病毒(VSV)刺激人宫颈癌HeLa细胞, 用RT-PCR克隆HuIFN-λ1和HuIFN-λ2基因, 与PCAGG-EGFP真核表达载体连接, 构建重组体PCAGG-HuIFN-λ1和PCAGG-HuIFN-λ2并进行鉴定, 后在BHK-21细胞进行表达, 采用VSV*GFP于人肺腺癌A549上进行表达产物抗病毒活性测定;并通过已构建的MDBK-Mxp-Luc细胞系对HuIFN-λ1和HuIFN-λ2诱导MxA抗病毒蛋白产生的特性进行研究.结果:HuIFN-λ1-PMD18-T Vector和HuIFN-λ2-PMD18-T Vector的SacⅠ、XhoⅠ和SacⅠ和SalⅠ双酶切鉴定, 均出现610 bp大小的带, 测序示与GenBank上报道的序列完全一致.PCAGG-HuIFN-λ1活性104 IU/mL, PCAGG-HuIFN-λ2活性为102 IU/mL, 且PCAGG-HuIFN-λ1诱导Mx抗病毒蛋白的表达一定时间内随时间延长表达不断增强, 9～12 h达高峰, 24 h后消失(P＜0.05).结论:成功构建了PCAGG-HuIFN-λ1PCAGG-HuIFN-λ2 的真核表达载体并在BHK-21细胞中得到表达, 其抗病毒活性与诱导Mx抗病毒蛋白密切相关.
目的:研究HuIFN-λ1和HuIFN-λ2真覈細胞重組錶達及其生物學活性.方法:用水皰性口炎病毒(VSV)刺激人宮頸癌HeLa細胞, 用RT-PCR剋隆HuIFN-λ1和HuIFN-λ2基因, 與PCAGG-EGFP真覈錶達載體連接, 構建重組體PCAGG-HuIFN-λ1和PCAGG-HuIFN-λ2併進行鑒定, 後在BHK-21細胞進行錶達, 採用VSV*GFP于人肺腺癌A549上進行錶達產物抗病毒活性測定;併通過已構建的MDBK-Mxp-Luc細胞繫對HuIFN-λ1和HuIFN-λ2誘導MxA抗病毒蛋白產生的特性進行研究.結果:HuIFN-λ1-PMD18-T Vector和HuIFN-λ2-PMD18-T Vector的SacⅠ、XhoⅠ和SacⅠ和SalⅠ雙酶切鑒定, 均齣現610 bp大小的帶, 測序示與GenBank上報道的序列完全一緻.PCAGG-HuIFN-λ1活性104 IU/mL, PCAGG-HuIFN-λ2活性為102 IU/mL, 且PCAGG-HuIFN-λ1誘導Mx抗病毒蛋白的錶達一定時間內隨時間延長錶達不斷增彊, 9～12 h達高峰, 24 h後消失(P＜0.05).結論:成功構建瞭PCAGG-HuIFN-λ1PCAGG-HuIFN-λ2 的真覈錶達載體併在BHK-21細胞中得到錶達, 其抗病毒活性與誘導Mx抗病毒蛋白密切相關.
목적:연구HuIFN-λ1화HuIFN-λ2진핵세포중조표체급기생물학활성.방법:용수포성구염병독(VSV)자격인궁경암HeLa세포, 용RT-PCR극륭HuIFN-λ1화HuIFN-λ2기인, 여PCAGG-EGFP진핵표체재체련접, 구건중조체PCAGG-HuIFN-λ1화PCAGG-HuIFN-λ2병진행감정, 후재BHK-21세포진행표체, 채용VSV*GFP우인폐선암A549상진행표체산물항병독활성측정;병통과이구건적MDBK-Mxp-Luc세포계대HuIFN-λ1화HuIFN-λ2유도MxA항병독단백산생적특성진행연구.결과:HuIFN-λ1-PMD18-T Vector화HuIFN-λ2-PMD18-T Vector적SacⅠ、XhoⅠ화SacⅠ화SalⅠ쌍매절감정, 균출현610 bp대소적대, 측서시여GenBank상보도적서렬완전일치.PCAGG-HuIFN-λ1활성104 IU/mL, PCAGG-HuIFN-λ2활성위102 IU/mL, 차PCAGG-HuIFN-λ1유도Mx항병독단백적표체일정시간내수시간연장표체불단증강, 9～12 h체고봉, 24 h후소실(P＜0.05).결론:성공구건료PCAGG-HuIFN-λ1PCAGG-HuIFN-λ2 적진핵표체재체병재BHK-21세포중득도표체, 기항병독활성여유도Mx항병독단백밀절상관.
