南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2010年
6期
1226-1229
,共4页
刘安玲%赵莉%Ma Dong-zhu%贾春宏%李明%温芝华%叶永斌
劉安玲%趙莉%Ma Dong-zhu%賈春宏%李明%溫芝華%葉永斌
류안령%조리%Ma Dong-zhu%가춘굉%리명%온지화%협영빈
FKBP38%多克隆抗体%Western免疫印迹%免疫荧光%免疫组织化学
FKBP38%多剋隆抗體%Western免疫印跡%免疫熒光%免疫組織化學
FKBP38%다극륭항체%Western면역인적%면역형광%면역조직화학
目的 构建人FKBP38 N-末端及C-末端原核表达载体并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化基因表达产物,制备兔多克隆抗体并对该抗体用于Western免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测进行评价,为研究FKBP38的功能奠定基础.方法 以人FKBP38 cDNA为模板,根据人FKBP38全长cDNA系列,设计PCR引物分别扩增N-末端(1-207aa)及C-末端(209-387aa),将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-6P1中,经BamH I/Sa1 I双酶切鉴定.GST-FKBP38-N及GST-FKBP38-C融合蛋白在硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下在大肠杆菌BL21中得到表达.利用谷胱甘肽亲和层析纯化融合蛋白,用纯化的GST-FKBP38-N融合蛋白及GST-FKBP38-C融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体并进行纯化.使用纯化的抗FKBP38多抗以Western免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测FKBP38的表达与细胞内的定位.结果 成功构建FKBP38 N-末端及C-末端原核表达载体,表达并纯化了GST-FKBP38-N融合蛋白及GST-FKBP38-C融合蛋白,制备并纯化了FKBP38特异性抗体.该抗体用于Western免疫印迹检测FKBP38在不同细胞株中的表达,特异性强、效价高;用于免疫荧光检测FKBP38在细胞内主要定位于线粒体上;用于免疫组织化学检测FKBP38在乳腺组织细胞呈现胞浆阳性.结论 FKBP38特异性抗体制备成功,该抗体可用于FKBP38的免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测,为深入研究FKBP38的功能奠定基础.
目的 構建人FKBP38 N-末耑及C-末耑原覈錶達載體併使其在大腸桿菌中高效錶達,純化基因錶達產物,製備兔多剋隆抗體併對該抗體用于Western免疫印跡、免疫熒光及免疫組織化學檢測進行評價,為研究FKBP38的功能奠定基礎.方法 以人FKBP38 cDNA為模闆,根據人FKBP38全長cDNA繫列,設計PCR引物分彆擴增N-末耑(1-207aa)及C-末耑(209-387aa),將擴增產物剋隆至大腸桿菌錶達載體pGEX-6P1中,經BamH I/Sa1 I雙酶切鑒定.GST-FKBP38-N及GST-FKBP38-C融閤蛋白在硫代半乳糖苷(IPTG)誘導下在大腸桿菌BL21中得到錶達.利用穀胱甘肽親和層析純化融閤蛋白,用純化的GST-FKBP38-N融閤蛋白及GST-FKBP38-C融閤蛋白免疫傢兔製備多剋隆抗體併進行純化.使用純化的抗FKBP38多抗以Western免疫印跡、免疫熒光及免疫組織化學檢測FKBP38的錶達與細胞內的定位.結果 成功構建FKBP38 N-末耑及C-末耑原覈錶達載體,錶達併純化瞭GST-FKBP38-N融閤蛋白及GST-FKBP38-C融閤蛋白,製備併純化瞭FKBP38特異性抗體.該抗體用于Western免疫印跡檢測FKBP38在不同細胞株中的錶達,特異性彊、效價高;用于免疫熒光檢測FKBP38在細胞內主要定位于線粒體上;用于免疫組織化學檢測FKBP38在乳腺組織細胞呈現胞漿暘性.結論 FKBP38特異性抗體製備成功,該抗體可用于FKBP38的免疫印跡、免疫熒光及免疫組織化學檢測,為深入研究FKBP38的功能奠定基礎.
목적 구건인FKBP38 N-말단급C-말단원핵표체재체병사기재대장간균중고효표체,순화기인표체산물,제비토다극륭항체병대해항체용우Western면역인적、면역형광급면역조직화학검측진행평개,위연구FKBP38적공능전정기출.방법 이인FKBP38 cDNA위모판,근거인FKBP38전장cDNA계렬,설계PCR인물분별확증N-말단(1-207aa)급C-말단(209-387aa),장확증산물극륭지대장간균표체재체pGEX-6P1중,경BamH I/Sa1 I쌍매절감정.GST-FKBP38-N급GST-FKBP38-C융합단백재류대반유당감(IPTG)유도하재대장간균BL21중득도표체.이용곡광감태친화층석순화융합단백,용순화적GST-FKBP38-N융합단백급GST-FKBP38-C융합단백면역가토제비다극륭항체병진행순화.사용순화적항FKBP38다항이Western면역인적、면역형광급면역조직화학검측FKBP38적표체여세포내적정위.결과 성공구건FKBP38 N-말단급C-말단원핵표체재체,표체병순화료GST-FKBP38-N융합단백급GST-FKBP38-C융합단백,제비병순화료FKBP38특이성항체.해항체용우Western면역인적검측FKBP38재불동세포주중적표체,특이성강、효개고;용우면역형광검측FKBP38재세포내주요정위우선립체상;용우면역조직화학검측FKBP38재유선조직세포정현포장양성.결론 FKBP38특이성항체제비성공,해항체가용우FKBP38적면역인적、면역형광급면역조직화학검측,위심입연구FKBP38적공능전정기출.
