重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2011年
9期
896-898
,共3页
熊晓峰%陈陵%范亚川%邹利全%张方征%王洪斌%游斌%刘志鹏
熊曉峰%陳陵%範亞川%鄒利全%張方徵%王洪斌%遊斌%劉誌鵬
웅효봉%진릉%범아천%추리전%장방정%왕홍빈%유빈%류지붕
RNA指导的DNA聚合酶%微RNAs%人胚肾293细胞%复制缺陷型腺病毒载体
RNA指導的DNA聚閤酶%微RNAs%人胚腎293細胞%複製缺陷型腺病毒載體
RNA지도적DNA취합매%미RNAs%인배신293세포%복제결함형선병독재체
目的 包装负载人端粒酶逆转录酶(hTERT)调控相关miR-138前体全长cDNA(pre-miR-138)的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-miR138).方法 pre-miR-138全基因合成后插入腺病毒穿梭质粒(pDC315-miR138),与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE1、3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装Ad-miR138并大量扩增,收集纯化.对纯化后的Ad-miR138进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定. 结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×1010 pfu/mL. 电镜可见病毒在HEK293细胞中大量复制. PCR双引物鉴定Ad-miR138可扩增出Ad及pre-miR-138特异片段,而对照Ad-LacZ只能扩增出Ad特异片段,不能扩增出pre-miR-138特异片段.结论 成功包装了负载miR-138全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步研究微RNAs(microRNAs)在肿瘤发生、发展中的作用,以及hTERT调控相关miR-138在肿瘤治疗中的价值奠定了基础.
目的 包裝負載人耑粒酶逆轉錄酶(hTERT)調控相關miR-138前體全長cDNA(pre-miR-138)的複製缺陷型腺病毒載體(Ad-miR138).方法 pre-miR-138全基因閤成後插入腺病毒穿梭質粒(pDC315-miR138),與腺病毒包裝質粒pBHGloxDeltaE1、3Cre共轉染人胚腎293細胞(HEK293),包裝Ad-miR138併大量擴增,收集純化.對純化後的Ad-miR138進行滴度測定、感染性鑒定、電鏡鑒定及雙引物PCR鑒定. 結果包裝成功的腺病毒載體具有良好的感染性,純化濃縮後的病毒滴度可達5×1010 pfu/mL. 電鏡可見病毒在HEK293細胞中大量複製. PCR雙引物鑒定Ad-miR138可擴增齣Ad及pre-miR-138特異片段,而對照Ad-LacZ隻能擴增齣Ad特異片段,不能擴增齣pre-miR-138特異片段.結論 成功包裝瞭負載miR-138全長cDNA的複製缺陷型腺病毒載體,為進一步研究微RNAs(microRNAs)在腫瘤髮生、髮展中的作用,以及hTERT調控相關miR-138在腫瘤治療中的價值奠定瞭基礎.
목적 포장부재인단립매역전록매(hTERT)조공상관miR-138전체전장cDNA(pre-miR-138)적복제결함형선병독재체(Ad-miR138).방법 pre-miR-138전기인합성후삽입선병독천사질립(pDC315-miR138),여선병독포장질립pBHGloxDeltaE1、3Cre공전염인배신293세포(HEK293),포장Ad-miR138병대량확증,수집순화.대순화후적Ad-miR138진행적도측정、감염성감정、전경감정급쌍인물PCR감정. 결과포장성공적선병독재체구유량호적감염성,순화농축후적병독적도가체5×1010 pfu/mL. 전경가견병독재HEK293세포중대량복제. PCR쌍인물감정Ad-miR138가확증출Ad급pre-miR-138특이편단,이대조Ad-LacZ지능확증출Ad특이편단,불능확증출pre-miR-138특이편단.결론 성공포장료부재miR-138전장cDNA적복제결함형선병독재체,위진일보연구미RNAs(microRNAs)재종류발생、발전중적작용,이급hTERT조공상관miR-138재종류치료중적개치전정료기출.
