大鼠胱抑素C腺病毒高效表达载体的构建在大鼠心肌成纤维细胞中的表达
대서광억소C선병독고효표체재체적구건재대서심기성섬유세포중적표체
Construction of recombinant adenovirus vector carrying CysC gene and its expression in rat cardiac fibroblast
  • 万方数据
    中华老年心脑血管病杂志 중화노년심뇌혈관병잡지
    CHINESE JOURNAL OF GERIATRIC CARDIOVASCULAR AND CEREBROVASCULAR DISEASES
    2011年 3期 252-255 ,共4页

    张书敏%王永梅%杜贻萌%魏峰涛%蒋卫东%王欣%董兆强%姜红%鹿庆华

    장서민%왕영매%두이맹%위봉도%장위동%왕흔%동조강%강홍%록경화

    腺病毒科%基因表达%转染%肌细胞,心脏%成纤维细胞%半胱氨酸蛋白酶抑制剂%逆转录聚合酶链反应 腺病毒科%基因錶達%轉染%肌細胞,心髒%成纖維細胞%半胱氨痠蛋白酶抑製劑%逆轉錄聚閤酶鏈反應
    선병독과%기인표체%전염%기세포,심장%성섬유세포%반광안산단백매억제제%역전록취합매련반응
    目的 采用GatewayTM技术构建携带胱抑素C(CysC)基因的重组腺病毒载体,并观察在大鼠心肌成纤维细胞中的表达.方法 采用RT-PCR方法从大鼠心肌组织中扩增出CysC基因,将CysC基因经BP重组反应定向克隆至pDONR221载体,获得重组质粒pDONR221-CysC,经PCR及测序验证正确的pDONR221-CysC与腺病毒载体pAd/CMV/V5-DEST在体外进行LR重组反应,CysC取代pAd/CMV/V5-DEST中的ccdB-CmR基因,获得重组腺病毒载体pAd/CMV/V5-DEST-CysC.采用Western blot技术检测CysC蛋白在293A细胞及大鼠心肌成纤维细胞中的表达.将培养的心肌成纤维细胞随机分为实验组、空载体组和对照组.结果CysC腺病毒高效表达载体构建成功,测得病毒滴度为5.36×1010ifu/ml.用重组CysC腺病毒转染心肌成纤维细胞24h后,实验组的转染效率最高(≥90%);与对照组和空载体组比较,实验组CysC蛋白表达明显上调(P＜0.05).结论 成功构建了大鼠CysC腺病毒高效表达载体,并成功包装了含有该基因的重组腺病毒,可有效转染心肌成纤维细胞.
    목적 채용GatewayTM기술구건휴대광억소C(CysC)기인적중조선병독재체,병관찰재대서심기성섬유세포중적표체.방법 채용RT-PCR방법종대서심기조직중확증출CysC기인,장CysC기인경BP중조반응정향극륭지pDONR221재체,획득중조질립pDONR221-CysC,경PCR급측서험증정학적pDONR221-CysC여선병독재체pAd/CMV/V5-DEST재체외진행LR중조반응,CysC취대pAd/CMV/V5-DEST중적ccdB-CmR기인,획득중조선병독재체pAd/CMV/V5-DEST-CysC.채용Western blot기술검측CysC단백재293A세포급대서심기성섬유세포중적표체.장배양적심기성섬유세포수궤분위실험조、공재체조화대조조.결과CysC선병독고효표체재체구건성공,측득병독적도위5.36×1010ifu/ml.용중조CysC선병독전염심기성섬유세포24h후,실험조적전염효솔최고(≥90%);여대조조화공재체조비교,실험조CysC단백표체명현상조(P＜0.05).결론 성공구건료대서CysC선병독고효표체재체,병성공포장료함유해기인적중조선병독,가유효전염심기성섬유세포.
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