首都医科大学学报
首都醫科大學學報
수도의과대학학보
JOURNAL OF CAPITAL UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES
2004年
2期
159-161
,共3页
孙丽翠%王雅梅%祁雅慧%闫豫东%张静宜
孫麗翠%王雅梅%祁雅慧%閆豫東%張靜宜
손려취%왕아매%기아혜%염예동%장정의
人VEGF%重组杆状病毒载体%PCR%噬斑筛选
人VEGF%重組桿狀病毒載體%PCR%噬斑篩選
인VEGF%중조간상병독재체%PCR%서반사선
为了在昆虫杆状病毒表达系统表达人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因,用Hind Ⅲ对pcDNA 3.1/VEGF进行酶切,回收575 bp的VEGF片段,与pFastBacI载体连接,得到含VEGF基因的转座载体pFast/VEGF,Nco I酶切鉴定方向;将其转化到含有穿梭载体杆粒(Bacmid) 的DH10Bac感受态细胞,得到重组杆状病毒穿梭载体Bacmid/VEGF,采用琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增对重组转座载体、穿梭载体进行鉴定.将Bacmid/VEGF转染sf-9细胞,进行病毒重组及噬斑筛选.结果:琼脂糖电泳得到杆粒(Bacmid)DNA条带,PCR扩增得到575 bp的VEGF片段,病毒液在10-7稀释度时出现噬斑,约50个/孔.说明已成功构建了重组杆状病毒穿梭载体并重组出杆状病毒.
為瞭在昆蟲桿狀病毒錶達繫統錶達人血管內皮細胞生長因子(VEGF)基因,用Hind Ⅲ對pcDNA 3.1/VEGF進行酶切,迴收575 bp的VEGF片段,與pFastBacI載體連接,得到含VEGF基因的轉座載體pFast/VEGF,Nco I酶切鑒定方嚮;將其轉化到含有穿梭載體桿粒(Bacmid) 的DH10Bac感受態細胞,得到重組桿狀病毒穿梭載體Bacmid/VEGF,採用瓊脂糖凝膠電泳、PCR擴增對重組轉座載體、穿梭載體進行鑒定.將Bacmid/VEGF轉染sf-9細胞,進行病毒重組及噬斑篩選.結果:瓊脂糖電泳得到桿粒(Bacmid)DNA條帶,PCR擴增得到575 bp的VEGF片段,病毒液在10-7稀釋度時齣現噬斑,約50箇/孔.說明已成功構建瞭重組桿狀病毒穿梭載體併重組齣桿狀病毒.
위료재곤충간상병독표체계통표체인혈관내피세포생장인자(VEGF)기인,용Hind Ⅲ대pcDNA 3.1/VEGF진행매절,회수575 bp적VEGF편단,여pFastBacI재체련접,득도함VEGF기인적전좌재체pFast/VEGF,Nco I매절감정방향;장기전화도함유천사재체간립(Bacmid) 적DH10Bac감수태세포,득도중조간상병독천사재체Bacmid/VEGF,채용경지당응효전영、PCR확증대중조전좌재체、천사재체진행감정.장Bacmid/VEGF전염sf-9세포,진행병독중조급서반사선.결과:경지당전영득도간립(Bacmid)DNA조대,PCR확증득도575 bp적VEGF편단,병독액재10-7희석도시출현서반,약50개/공.설명이성공구건료중조간상병독천사재체병중조출간상병독.
