细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2005年
2期
141-143
,共3页
罗以勤%王梁华%球谊%焦炳华
囉以勤%王樑華%毬誼%焦炳華
라이근%왕량화%구의%초병화
tumstatin45-132基因%表达%生物学活性
tumstatin45-132基因%錶達%生物學活性
tumstatin45-132기인%표체%생물학활성
目的: 克隆人tumstatin全长编码区基因及编码tumstatin45-132的基因, 在大肠杆菌中表达. 方法: 采用RT-PCR从人胚肾细胞系293细胞中克隆人的tumstatin全长编码基因, 继以PCR扩增tumstatin45-132(45-132位氨基酸)编码基因, PCR产物克隆到pBV220载体中, 测序证实后, 转化E.coli BL21, 于42℃进行热诱导表达. 用SDS-PAGE分析表达产物, 对重组蛋白纯化后用内皮细胞增殖试验测定其生物学活性. 结果: RT-PCR扩增出tumstatin全长编码基因, 以PCR扩增出tumstatin45-132的编码基因, 经序列分析证实与GenBank中的序列完全一致.以含有tumstatin45-132编码基因的表达载体转化E.coli BL21后, 可表达出相对分子质量(Mr)为9 600的重组蛋白.表达产物的蛋白量占菌体蛋白量的10%, 纯化后能抑制内皮细胞的增殖.结论: 成功克隆全长tumstatin cDNA, 并在大肠杆菌中表达重组tumstatin45-132蛋白, 证实其具有抑制内皮细胞增殖的活性.
目的: 剋隆人tumstatin全長編碼區基因及編碼tumstatin45-132的基因, 在大腸桿菌中錶達. 方法: 採用RT-PCR從人胚腎細胞繫293細胞中剋隆人的tumstatin全長編碼基因, 繼以PCR擴增tumstatin45-132(45-132位氨基痠)編碼基因, PCR產物剋隆到pBV220載體中, 測序證實後, 轉化E.coli BL21, 于42℃進行熱誘導錶達. 用SDS-PAGE分析錶達產物, 對重組蛋白純化後用內皮細胞增殖試驗測定其生物學活性. 結果: RT-PCR擴增齣tumstatin全長編碼基因, 以PCR擴增齣tumstatin45-132的編碼基因, 經序列分析證實與GenBank中的序列完全一緻.以含有tumstatin45-132編碼基因的錶達載體轉化E.coli BL21後, 可錶達齣相對分子質量(Mr)為9 600的重組蛋白.錶達產物的蛋白量佔菌體蛋白量的10%, 純化後能抑製內皮細胞的增殖.結論: 成功剋隆全長tumstatin cDNA, 併在大腸桿菌中錶達重組tumstatin45-132蛋白, 證實其具有抑製內皮細胞增殖的活性.
목적: 극륭인tumstatin전장편마구기인급편마tumstatin45-132적기인, 재대장간균중표체. 방법: 채용RT-PCR종인배신세포계293세포중극륭인적tumstatin전장편마기인, 계이PCR확증tumstatin45-132(45-132위안기산)편마기인, PCR산물극륭도pBV220재체중, 측서증실후, 전화E.coli BL21, 우42℃진행열유도표체. 용SDS-PAGE분석표체산물, 대중조단백순화후용내피세포증식시험측정기생물학활성. 결과: RT-PCR확증출tumstatin전장편마기인, 이PCR확증출tumstatin45-132적편마기인, 경서렬분석증실여GenBank중적서렬완전일치.이함유tumstatin45-132편마기인적표체재체전화E.coli BL21후, 가표체출상대분자질량(Mr)위9 600적중조단백.표체산물적단백량점균체단백량적10%, 순화후능억제내피세포적증식.결론: 성공극륭전장tumstatin cDNA, 병재대장간균중표체중조tumstatin45-132단백, 증실기구유억제내피세포증식적활성.