军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2005年
4期
305-308,336
,共5页
丁丽华%焦园园%刘雨飞%方言%周蕾%王晓辉%黄翠芬%叶棋浓
丁麗華%焦園園%劉雨飛%方言%週蕾%王曉輝%黃翠芬%葉棋濃
정려화%초완완%류우비%방언%주뢰%왕효휘%황취분%협기농
FHL2%IGFBP-7%相互作用%GST沉淀%酵母双杂交
FHL2%IGFBP-7%相互作用%GST沉澱%酵母雙雜交
FHL2%IGFBP-7%상호작용%GST침정%효모쌍잡교
目的:利用酵母双杂交技术筛选FHL2的相互作用蛋白,为进一步研究FHL2的功能奠定基础.方法:从卵巢文库中钓取FHL2 cDNA,构建诱饵蛋白载体pAS2-1-FHL2,利用酵母双杂交筛选技术,在卵巢文库中筛选与FHL2相互作用的蛋白.将含有pACT2-候选基因的酵母菌与含有pAS2-1-FHL2的酵母菌进行交配实验,利用LacZ报告基因检测FHL2与候选蛋白之间是否存在相互作用.将FHL2和候选蛋白分别构建到pGEX-KG和pET-28a上,并纯化GST-FHL2和His-候选蛋白融合蛋白,利用GST沉淀实验进一步验证FHL2和候选蛋白的体外相互作用.结果:所获取的候选蛋白为IGFBP-7,是胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBPs)家族中的一员.交配实验表明,IGFBP-7与FHL2能特异性地相互作用,而不与空载体或BRCT1对照相互作用.GST沉淀实验进一步验证,IGFBP-7能与FHL2结合,而不与GST结合.结论:FHL2和IGFBP-7在体内及体外均可发生特异性的相互作用.
目的:利用酵母雙雜交技術篩選FHL2的相互作用蛋白,為進一步研究FHL2的功能奠定基礎.方法:從卵巢文庫中釣取FHL2 cDNA,構建誘餌蛋白載體pAS2-1-FHL2,利用酵母雙雜交篩選技術,在卵巢文庫中篩選與FHL2相互作用的蛋白.將含有pACT2-候選基因的酵母菌與含有pAS2-1-FHL2的酵母菌進行交配實驗,利用LacZ報告基因檢測FHL2與候選蛋白之間是否存在相互作用.將FHL2和候選蛋白分彆構建到pGEX-KG和pET-28a上,併純化GST-FHL2和His-候選蛋白融閤蛋白,利用GST沉澱實驗進一步驗證FHL2和候選蛋白的體外相互作用.結果:所穫取的候選蛋白為IGFBP-7,是胰島素樣生長因子結閤蛋白(IGFBPs)傢族中的一員.交配實驗錶明,IGFBP-7與FHL2能特異性地相互作用,而不與空載體或BRCT1對照相互作用.GST沉澱實驗進一步驗證,IGFBP-7能與FHL2結閤,而不與GST結閤.結論:FHL2和IGFBP-7在體內及體外均可髮生特異性的相互作用.
목적:이용효모쌍잡교기술사선FHL2적상호작용단백,위진일보연구FHL2적공능전정기출.방법:종란소문고중조취FHL2 cDNA,구건유이단백재체pAS2-1-FHL2,이용효모쌍잡교사선기술,재란소문고중사선여FHL2상호작용적단백.장함유pACT2-후선기인적효모균여함유pAS2-1-FHL2적효모균진행교배실험,이용LacZ보고기인검측FHL2여후선단백지간시부존재상호작용.장FHL2화후선단백분별구건도pGEX-KG화pET-28a상,병순화GST-FHL2화His-후선단백융합단백,이용GST침정실험진일보험증FHL2화후선단백적체외상호작용.결과:소획취적후선단백위IGFBP-7,시이도소양생장인자결합단백(IGFBPs)가족중적일원.교배실험표명,IGFBP-7여FHL2능특이성지상호작용,이불여공재체혹BRCT1대조상호작용.GST침정실험진일보험증,IGFBP-7능여FHL2결합,이불여GST결합.결론:FHL2화IGFBP-7재체내급체외균가발생특이성적상호작용.
