CAJ | 학술논문

目的:使用Pgenesil-1质粒构建CD105RNA干扰重组体,在激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管模型中,筛选高效抑制CD105基因表达的shRNA.方法:根据CD105基因序列信息设计了3条shRNA以及1条非特异阴性序列,利用含U6启动子的表达质粒Pgenesil-1构建其RNA干扰重组体.采用视网膜下注射的方法使shRNA表达质粒转染大鼠视网膜和脉络膜,观察质粒所携带绿色荧光蛋白基因表达情况.根据不同的表达质粒对BN大鼠CNV模型2wk时CD105基因mRNA表达的抑制效果与空白对照及仅加转染试剂组比较分析,筛选有效的抑制序列.结果:转染后1d,在荧光显微镜下可见有明显的绿色荧光分布于实验眼视网膜全层,包括RPE层.2～3wk荧光强度比1wk增强,并持续表达4wk.空白对照眼无绿色荧光表达.构建了3条CD105shRNA和阳性对照Pgenesil-HK,基因测序证实目的序列成功插入质粒Pgenesil-1中.研究发现不同的质粒转染后对CD105在CNV高峰期的表达干预效果不同.Pgenesil-eng2和Pgenesil-eng3可明显抑制CNV模型在2wk时CD105mRNA的表达,抑制效率分别为(78±5)%(P<0.01);(52±3)%(P<0.01).转染Pgenesil-engl, Pgenesil-HK组及仅加转染试剂组与空白对照组相比CD105mRNA表达水平无明显变化.结论:在阳离子脂质体辅助下,Pgenesil-1质粒可以成功地将目的基因转染至大鼠视网膜各层次,且表达强度高,时间长于4wk.Pgenesil-eng2能明显抑制BN大鼠视网膜组织CD105mRNA的表达.
목적:사용Pgenesil-1질립구건CD105RNA간우중조체,재격광유도BN대서맥락막신생혈관모형중,사선고효억제CD105기인표체적shRNA.방법:근거CD105기인서렬신식설계료3조shRNA이급1조비특이음성서렬,이용함U6계동자적표체질립Pgenesil-1구건기RNA간우중조체.채용시망막하주사적방법사shRNA표체질립전염대서시망막화맥락막,관찰질립소휴대록색형광단백기인표체정황.근거불동적표체질립대BN대서CNV모형2wk시CD105기인mRNA표체적억제효과여공백대조급부가전염시제조비교분석,사선유효적억제서렬.결과:전염후1d,재형광현미경하가견유명현적록색형광분포우실험안시망막전층,포괄RPE층.2～3wk형광강도비1wk증강,병지속표체4wk.공백대조안무록색형광표체.구건료3조CD105shRNA화양성대조Pgenesil-HK,기인측서증실목적서렬성공삽입질립Pgenesil-1중.연구발현불동적질립전염후대CD105재CNV고봉기적표체간예효과불동.Pgenesil-eng2화Pgenesil-eng3가명현억제CNV모형재2wk시CD105mRNA적표체,억제효솔분별위(78±5)%(P<0.01);(52±3)%(P<0.01).전염Pgenesil-engl, Pgenesil-HK조급부가전염시제조여공백대조조상비CD105mRNA표체수평무명현변화.결론:재양리자지질체보조하,Pgenesil-1질립가이성공지장목적기인전염지대서시망막각층차,차표체강도고,시간장우4wk.Pgenesil-eng2능명현억제BN대서시망막조직CD105mRNA적표체.