工业微生物
工業微生物
공업미생물
INDUSTRIAL MICROBIOLOGY
2010年
4期
34-39
,共6页
华根霉脂肪酶%诱导温度%毕赤酵母%蛋白酶降解%聚合
華根黴脂肪酶%誘導溫度%畢赤酵母%蛋白酶降解%聚閤
화근매지방매%유도온도%필적효모%단백매강해%취합
比较了7 L发酵罐中不同诱导温度对华根霉前导肽脂肪酶在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达水平和稳定性的影响.通过实验表明在28 ℃条件下,最大酶活可以达到1412.5 U/mL,是30 ℃条件下的2.3倍,25 ℃条件下的1.3倍;而其产率可以达到12811 U/L·h-1,比产率达到82.6 U/gDCW·h-1.同时,在实验过程中发现诱导温度对目的蛋白的降解和聚合有重要的影响.通过对蛋白酶活性的测定和还原SDS-PAGE证实随着诱导温度的提高,蛋白酶活性急剧上升,从而导致由前导肽(37 kD)降解为成熟肽(30 kD)的降解作用的加剧.此现象在30 ℃条件下最为明显,在诱导84 h时前导肽已经全部降解为成熟肽.另外,通过非还原SDS-PAGE和分析表明随着诱导温度的提高也导致了二聚体的含量也逐渐增加.
比較瞭7 L髮酵罐中不同誘導溫度對華根黴前導肽脂肪酶在巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)中錶達水平和穩定性的影響.通過實驗錶明在28 ℃條件下,最大酶活可以達到1412.5 U/mL,是30 ℃條件下的2.3倍,25 ℃條件下的1.3倍;而其產率可以達到12811 U/L·h-1,比產率達到82.6 U/gDCW·h-1.同時,在實驗過程中髮現誘導溫度對目的蛋白的降解和聚閤有重要的影響.通過對蛋白酶活性的測定和還原SDS-PAGE證實隨著誘導溫度的提高,蛋白酶活性急劇上升,從而導緻由前導肽(37 kD)降解為成熟肽(30 kD)的降解作用的加劇.此現象在30 ℃條件下最為明顯,在誘導84 h時前導肽已經全部降解為成熟肽.另外,通過非還原SDS-PAGE和分析錶明隨著誘導溫度的提高也導緻瞭二聚體的含量也逐漸增加.
비교료7 L발효관중불동유도온도대화근매전도태지방매재파사덕필적효모(Pichia pastoris)중표체수평화은정성적영향.통과실험표명재28 ℃조건하,최대매활가이체도1412.5 U/mL,시30 ℃조건하적2.3배,25 ℃조건하적1.3배;이기산솔가이체도12811 U/L·h-1,비산솔체도82.6 U/gDCW·h-1.동시,재실험과정중발현유도온도대목적단백적강해화취합유중요적영향.통과대단백매활성적측정화환원SDS-PAGE증실수착유도온도적제고,단백매활성급극상승,종이도치유전도태(37 kD)강해위성숙태(30 kD)적강해작용적가극.차현상재30 ℃조건하최위명현,재유도84 h시전도태이경전부강해위성숙태.령외,통과비환원SDS-PAGE화분석표명수착유도온도적제고야도치료이취체적함량야축점증가.
