草地学报
草地學報
초지학보
ACTA AGRESTIA SINICA
2012年
4期
735-740
,共6页
李燕%康俊梅%张铁军%杨青川%房锋
李燕%康俊梅%張鐵軍%楊青川%房鋒
리연%강준매%장철군%양청천%방봉
紫花苜蓿%MsZIP基因%超表达载体构建%烟草转化
紫花苜蓿%MsZIP基因%超錶達載體構建%煙草轉化
자화목숙%MsZIP기인%초표체재체구건%연초전화
根据已经克隆得到的MsZIP基因(GenBank序列号:HQ911778),合成编码区cDNA,构建植物超表达载体PBI-MsZIP.将MsZIP基因插入到含有启动子35S和终止子nos的载体PBI121中,酶切鉴定表明,目的基因已经正确的插入到载体中,超表达载体构建成功.采用CaCl2冻融法将其转入农杆菌中,然后采用农杆菌介导的方法转化烟草(Nicotiana tobacum),共得到12株抗性烟草苗,选取其中长势良好的3株进行分析.结果表明:转基因烟草的PCR,RT-PCR和Southern-blot检测均得到了与目的条带大小一致的片段,说明已经成功获得了能够表达MsZIP基因的转基因烟草；进一步对转基因烟草进行组织化学染色分析,该基因在根、茎、叶中都可以表达.本试验为MsZIP基因功能的研究提供了理论依据和试验材料.
根據已經剋隆得到的MsZIP基因(GenBank序列號:HQ911778),閤成編碼區cDNA,構建植物超錶達載體PBI-MsZIP.將MsZIP基因插入到含有啟動子35S和終止子nos的載體PBI121中,酶切鑒定錶明,目的基因已經正確的插入到載體中,超錶達載體構建成功.採用CaCl2凍融法將其轉入農桿菌中,然後採用農桿菌介導的方法轉化煙草(Nicotiana tobacum),共得到12株抗性煙草苗,選取其中長勢良好的3株進行分析.結果錶明:轉基因煙草的PCR,RT-PCR和Southern-blot檢測均得到瞭與目的條帶大小一緻的片段,說明已經成功穫得瞭能夠錶達MsZIP基因的轉基因煙草；進一步對轉基因煙草進行組織化學染色分析,該基因在根、莖、葉中都可以錶達.本試驗為MsZIP基因功能的研究提供瞭理論依據和試驗材料.
근거이경극륭득도적MsZIP기인(GenBank서렬호:HQ911778),합성편마구cDNA,구건식물초표체재체PBI-MsZIP.장MsZIP기인삽입도함유계동자35S화종지자nos적재체PBI121중,매절감정표명,목적기인이경정학적삽입도재체중,초표체재체구건성공.채용CaCl2동융법장기전입농간균중,연후채용농간균개도적방법전화연초(Nicotiana tobacum),공득도12주항성연초묘,선취기중장세량호적3주진행분석.결과표명:전기인연초적PCR,RT-PCR화Southern-blot검측균득도료여목적조대대소일치적편단,설명이경성공획득료능구표체MsZIP기인적전기인연초；진일보대전기인연초진행조직화학염색분석,해기인재근、경、협중도가이표체.본시험위MsZIP기인공능적연구제공료이론의거화시험재료.
