植物遗传资源学报
植物遺傳資源學報
식물유전자원학보
JOURNAL OF PLANT GENETLC RESOURCES
2012年
3期
497-501
,共5页
盖树鹏%穆平%张风%董磊%郑国生
蓋樹鵬%穆平%張風%董磊%鄭國生
개수붕%목평%장풍%동뢰%정국생
牡丹%休眠%均一化cDNA%酵母杂交文库
牡丹%休眠%均一化cDNA%酵母雜交文庫
모단%휴면%균일화cDNA%효모잡교문고
以不同低温处理的牡丹花芽为试材,采用DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术结合SMARTTM(switching mechanism at 5'end ofRNA transcript)建库技术合成cDNA,cDNA与pGADT7 -Rec重组并转化酵母AH109,构建了冬季牡丹低温累积进程中的花芽均一化cDNA文库.经检测,原始文库滴度为1.77×106 cfu/ml,库容量为2.3×108.对管家基因18S rRNA均一化前后丰度检测表明,均一化程度＞26,随机挑取了188个克隆,PCR方法测得文库重组率大于95％,插入片段平均长度1200bp,构建的文库质量较高.该文库为进一步通过酵母杂交技术筛选低温解除牡丹休眠进程中受低温调控的转录因子和互作蛋白,进而为构建低温解除休眠的基因调控网络奠定了基础.
以不同低溫處理的牡丹花芽為試材,採用DSN(duplex-specific nuclease)均一化技術結閤SMARTTM(switching mechanism at 5'end ofRNA transcript)建庫技術閤成cDNA,cDNA與pGADT7 -Rec重組併轉化酵母AH109,構建瞭鼕季牡丹低溫纍積進程中的花芽均一化cDNA文庫.經檢測,原始文庫滴度為1.77×106 cfu/ml,庫容量為2.3×108.對管傢基因18S rRNA均一化前後豐度檢測錶明,均一化程度＞26,隨機挑取瞭188箇剋隆,PCR方法測得文庫重組率大于95％,插入片段平均長度1200bp,構建的文庫質量較高.該文庫為進一步通過酵母雜交技術篩選低溫解除牡丹休眠進程中受低溫調控的轉錄因子和互作蛋白,進而為構建低溫解除休眠的基因調控網絡奠定瞭基礎.
이불동저온처리적모단화아위시재,채용DSN(duplex-specific nuclease)균일화기술결합SMARTTM(switching mechanism at 5'end ofRNA transcript)건고기술합성cDNA,cDNA여pGADT7 -Rec중조병전화효모AH109,구건료동계모단저온루적진정중적화아균일화cDNA문고.경검측,원시문고적도위1.77×106 cfu/ml,고용량위2.3×108.대관가기인18S rRNA균일화전후봉도검측표명,균일화정도＞26,수궤도취료188개극륭,PCR방법측득문고중조솔대우95％,삽입편단평균장도1200bp,구건적문고질량교고.해문고위진일보통과효모잡교기술사선저온해제모단휴면진정중수저온조공적전록인자화호작단백,진이위구건저온해제휴면적기인조공망락전정료기출.
