中华实验外科杂志
中華實驗外科雜誌
중화실험외과잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL SURGERY
2005年
6期
659-661
,共3页
汪圣毅%王玉琦%符伟国%刘康达%张岩%张文夺
汪聖毅%王玉琦%符偉國%劉康達%張巖%張文奪
왕골의%왕옥기%부위국%류강체%장암%장문탈
单核细胞%白细胞介素%基因克隆
單覈細胞%白細胞介素%基因剋隆
단핵세포%백세포개소%기인극륭
目的从体外培养的外周血单个核细胞克隆人白细胞介素(hIL)-10 cDNA.方法淋巴细胞分离液自静脉血中分离出外周血单个核细胞(PBMCs),含ConA的RPMI 1640培养24 h,提取总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增hIL-10cDNA,克隆入pUCm-T载体,转化感受态细胞DH5α,蓝白筛选,PCR及Pvu I、Not I双酶切鉴定,重组DNA测序.结果 RT-PCR扩增产物560 bp,与预期片段大小一致,随机挑取白色菌落,小量提取的质粒经PCR、限制性内切酶酶切鉴定,目的条带与预期片段的大小均一致,测序结果与Genebank公布的hIL-10cDNA序列完全一致.结论从PBMC中扩增hIL-10cDNA,克隆至pUCm-T载体,方法较为简便,为进一步进行亚克隆及表达研究提供了可靠的前提条件.
目的從體外培養的外週血單箇覈細胞剋隆人白細胞介素(hIL)-10 cDNA.方法淋巴細胞分離液自靜脈血中分離齣外週血單箇覈細胞(PBMCs),含ConA的RPMI 1640培養24 h,提取總RNA,逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)擴增hIL-10cDNA,剋隆入pUCm-T載體,轉化感受態細胞DH5α,藍白篩選,PCR及Pvu I、Not I雙酶切鑒定,重組DNA測序.結果 RT-PCR擴增產物560 bp,與預期片段大小一緻,隨機挑取白色菌落,小量提取的質粒經PCR、限製性內切酶酶切鑒定,目的條帶與預期片段的大小均一緻,測序結果與Genebank公佈的hIL-10cDNA序列完全一緻.結論從PBMC中擴增hIL-10cDNA,剋隆至pUCm-T載體,方法較為簡便,為進一步進行亞剋隆及錶達研究提供瞭可靠的前提條件.
목적종체외배양적외주혈단개핵세포극륭인백세포개소(hIL)-10 cDNA.방법림파세포분리액자정맥혈중분리출외주혈단개핵세포(PBMCs),함ConA적RPMI 1640배양24 h,제취총RNA,역전록-취합매련반응(RT-PCR)확증hIL-10cDNA,극륭입pUCm-T재체,전화감수태세포DH5α,람백사선,PCR급Pvu I、Not I쌍매절감정,중조DNA측서.결과 RT-PCR확증산물560 bp,여예기편단대소일치,수궤도취백색균락,소량제취적질립경PCR、한제성내절매매절감정,목적조대여예기편단적대소균일치,측서결과여Genebank공포적hIL-10cDNA서렬완전일치.결론종PBMC중확증hIL-10cDNA,극륭지pUCm-T재체,방법교위간편,위진일보진행아극륭급표체연구제공료가고적전제조건.
