食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2003年
2期
73-79
,共7页
生姜%蛋白酶%纯化
生薑%蛋白酶%純化
생강%단백매%순화
生姜蛋白酶能够特异地水解P2位置是脯氨酸(Pro)的肽和蛋白质,这种对Pro的特异性使生姜蛋白酶成为一种非常有前途的用于蛋白质测序和蛋白质中稳定结构域识别的工具酶.中国传统食品"姜撞奶"采用姜汁作为凝乳剂,其中的凝乳因子已被证明是生姜蛋白酶.生姜蛋白酶的凝乳性质使之有望成为奶酪生产中小牛皱胃酶的替代品.此外,生姜蛋白酶在工业上还有更广阔的应用前景.本研究针对生姜蛋白酶的特点,制订一套简便有效的纯化方案,为进一步的基础研究和应用研究提供合格的样品酶.经过实验确立了以下纯化方案:将生姜制成丙酮粉,然后用20倍(W/V)0.1mol/L,pH8.0的磷酸缓冲液提取;上清液加硫酸铵至40%饱和度,其间控制pH＞7.0,离心弃去沉淀,上清液继续加硫酸铵至80%饱和度,离心,取沉淀;将沉淀先对0.1mol/L的氨水透析2h,然后对蒸馏水透析至无SO42-检出,最后对层析初始缓冲液进行延长透析至内外离子强度相等;上DEAE-纤维素DE-52柱;层析初始缓冲液为0.01mol/L,pH8.0Tris(含0.5mmol/L DTT,0.2mol/LNaCl),0.05～1mol/LNaCl梯度洗脱,柱1.5×5.0cm,流速0.75cm3/min,收集速度3ml/管,收集酶活峰,得到在SDS-PAGE上表现为一条带的样品C1和C2.
生薑蛋白酶能夠特異地水解P2位置是脯氨痠(Pro)的肽和蛋白質,這種對Pro的特異性使生薑蛋白酶成為一種非常有前途的用于蛋白質測序和蛋白質中穩定結構域識彆的工具酶.中國傳統食品"薑撞奶"採用薑汁作為凝乳劑,其中的凝乳因子已被證明是生薑蛋白酶.生薑蛋白酶的凝乳性質使之有望成為奶酪生產中小牛皺胃酶的替代品.此外,生薑蛋白酶在工業上還有更廣闊的應用前景.本研究針對生薑蛋白酶的特點,製訂一套簡便有效的純化方案,為進一步的基礎研究和應用研究提供閤格的樣品酶.經過實驗確立瞭以下純化方案:將生薑製成丙酮粉,然後用20倍(W/V)0.1mol/L,pH8.0的燐痠緩遲液提取;上清液加硫痠銨至40%飽和度,其間控製pH＞7.0,離心棄去沉澱,上清液繼續加硫痠銨至80%飽和度,離心,取沉澱;將沉澱先對0.1mol/L的氨水透析2h,然後對蒸餾水透析至無SO42-檢齣,最後對層析初始緩遲液進行延長透析至內外離子彊度相等;上DEAE-纖維素DE-52柱;層析初始緩遲液為0.01mol/L,pH8.0Tris(含0.5mmol/L DTT,0.2mol/LNaCl),0.05～1mol/LNaCl梯度洗脫,柱1.5×5.0cm,流速0.75cm3/min,收集速度3ml/管,收集酶活峰,得到在SDS-PAGE上錶現為一條帶的樣品C1和C2.
생강단백매능구특이지수해P2위치시포안산(Pro)적태화단백질,저충대Pro적특이성사생강단백매성위일충비상유전도적용우단백질측서화단백질중은정결구역식별적공구매.중국전통식품"강당내"채용강즙작위응유제,기중적응유인자이피증명시생강단백매.생강단백매적응유성질사지유망성위내락생산중소우추위매적체대품.차외,생강단백매재공업상환유경엄활적응용전경.본연구침대생강단백매적특점,제정일투간편유효적순화방안,위진일보적기출연구화응용연구제공합격적양품매.경과실험학립료이하순화방안:장생강제성병동분,연후용20배(W/V)0.1mol/L,pH8.0적린산완충액제취;상청액가류산안지40%포화도,기간공제pH＞7.0,리심기거침정,상청액계속가류산안지80%포화도,리심,취침정;장침정선대0.1mol/L적안수투석2h,연후대증류수투석지무SO42-검출,최후대층석초시완충액진행연장투석지내외리자강도상등;상DEAE-섬유소DE-52주;층석초시완충액위0.01mol/L,pH8.0Tris(함0.5mmol/L DTT,0.2mol/LNaCl),0.05～1mol/LNaCl제도세탈,주1.5×5.0cm,류속0.75cm3/min,수집속도3ml/관,수집매활봉,득도재SDS-PAGE상표현위일조대적양품C1화C2.
