生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2003年
4期
4-6
,共3页
严鸣%毛积芳%钟纪根%何健%朱秋峰%徐仁宝
嚴鳴%毛積芳%鐘紀根%何健%硃鞦峰%徐仁寶
엄명%모적방%종기근%하건%주추봉%서인보
CD18%Mac-1%YFP%融合蛋白%U937
CD18%Mac-1%YFP%融閤蛋白%U937
CD18%Mac-1%YFP%융합단백%U937
目的:构建并表达Mac-1的β链CD18与黄色荧光蛋白(YFP)的融合蛋白YFP-CD18,为进一步直视研究Mac-1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件.方法:首先将CD18的全长cDNA与pEYFP-C1进行酶切,构建YFP与CD18的N末端连接的表达载体,并将其转染至U937细胞株中进行表达.通过荧光显微镜观察转染成功后的U937细胞黄色荧光是否存在,以及流式细胞术检测确定PMA刺激后YFP-CD18活化后可否由胞浆内转位至膜上和测定PMA活化前后转染的U937细胞与其配基ICAM-1粘附活性的变化等方面来进行鉴定.结果:经酶切鉴定,pYFP-CD18构建正确,转染U937细胞株后,可见YFP-CD18融合蛋白发出的黄色荧光.结论:构建完成YFP-CD18融合基因并可以在U937细胞株中进行表达.
目的:構建併錶達Mac-1的β鏈CD18與黃色熒光蛋白(YFP)的融閤蛋白YFP-CD18,為進一步直視研究Mac-1在白細胞內的分佈、走嚮及歸宿提供物質條件.方法:首先將CD18的全長cDNA與pEYFP-C1進行酶切,構建YFP與CD18的N末耑連接的錶達載體,併將其轉染至U937細胞株中進行錶達.通過熒光顯微鏡觀察轉染成功後的U937細胞黃色熒光是否存在,以及流式細胞術檢測確定PMA刺激後YFP-CD18活化後可否由胞漿內轉位至膜上和測定PMA活化前後轉染的U937細胞與其配基ICAM-1粘附活性的變化等方麵來進行鑒定.結果:經酶切鑒定,pYFP-CD18構建正確,轉染U937細胞株後,可見YFP-CD18融閤蛋白髮齣的黃色熒光.結論:構建完成YFP-CD18融閤基因併可以在U937細胞株中進行錶達.
목적:구건병표체Mac-1적β련CD18여황색형광단백(YFP)적융합단백YFP-CD18,위진일보직시연구Mac-1재백세포내적분포、주향급귀숙제공물질조건.방법:수선장CD18적전장cDNA여pEYFP-C1진행매절,구건YFP여CD18적N말단련접적표체재체,병장기전염지U937세포주중진행표체.통과형광현미경관찰전염성공후적U937세포황색형광시부존재,이급류식세포술검측학정PMA자격후YFP-CD18활화후가부유포장내전위지막상화측정PMA활화전후전염적U937세포여기배기ICAM-1점부활성적변화등방면래진행감정.결과:경매절감정,pYFP-CD18구건정학,전염U937세포주후,가견YFP-CD18융합단백발출적황색형광.결론:구건완성YFP-CD18융합기인병가이재U937세포주중진행표체.
