病毒学报
病毒學報
병독학보
CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY
2004年
4期
298-302
,共5页
刘合宾%刘克洲%翁景清%朱智勇
劉閤賓%劉剋洲%翁景清%硃智勇
류합빈%류극주%옹경청%주지용
汉坦病毒%核蛋白(NP)%反转录病毒%转染
漢坦病毒%覈蛋白(NP)%反轉錄病毒%轉染
한탄병독%핵단백(NP)%반전록병독%전염
汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒型肺炎综合征(HPS)的主要病原体.由S基因编码的核蛋白(NP)主要与机体的细胞免疫有关,并调节病毒的复制及诱导细胞程序性死亡.构建了汉坦病毒Z10株核蛋白cDNA与含有pac基因的反转录病毒鼠干细胞病毒(MSCV)重组体MSCV-FlagNP,通过磷酸钙转录法导入产病毒的包装细胞系BOSC23中,产生完整的重组MSCV-FlagNP病毒.然后以重组病毒感染NIH 3T3细胞,利用Puromycin的选择特性(pac基因)对感染细胞进行连续压力筛选,获得了转核蛋白抗性细胞.利用Southern blot和PCR方法分别对核蛋白基因在抗性细胞染色体整合情况及其完整性进行了鉴定.并且用Western blot在抗性细胞中可检测到核蛋白的表达.进一步以Flag单克隆抗体介导的免疫荧光染色联合共聚焦激光扫描荧光显微镜,分析了内源性Flag融合核蛋白在抗性细胞内分布,发现核蛋白主要分布于胞浆及胞核周围区,并且部分核蛋白可聚集形成胞浆包涵体.转核蛋白基因细胞模型的建立,对进一步研究汉坦病毒核蛋白功能以及病毒复制机制有重要意义.
漢坦病毒是引起腎綜閤徵齣血熱(HFRS)和漢坦病毒型肺炎綜閤徵(HPS)的主要病原體.由S基因編碼的覈蛋白(NP)主要與機體的細胞免疫有關,併調節病毒的複製及誘導細胞程序性死亡.構建瞭漢坦病毒Z10株覈蛋白cDNA與含有pac基因的反轉錄病毒鼠榦細胞病毒(MSCV)重組體MSCV-FlagNP,通過燐痠鈣轉錄法導入產病毒的包裝細胞繫BOSC23中,產生完整的重組MSCV-FlagNP病毒.然後以重組病毒感染NIH 3T3細胞,利用Puromycin的選擇特性(pac基因)對感染細胞進行連續壓力篩選,穫得瞭轉覈蛋白抗性細胞.利用Southern blot和PCR方法分彆對覈蛋白基因在抗性細胞染色體整閤情況及其完整性進行瞭鑒定.併且用Western blot在抗性細胞中可檢測到覈蛋白的錶達.進一步以Flag單剋隆抗體介導的免疫熒光染色聯閤共聚焦激光掃描熒光顯微鏡,分析瞭內源性Flag融閤覈蛋白在抗性細胞內分佈,髮現覈蛋白主要分佈于胞漿及胞覈週圍區,併且部分覈蛋白可聚集形成胞漿包涵體.轉覈蛋白基因細胞模型的建立,對進一步研究漢坦病毒覈蛋白功能以及病毒複製機製有重要意義.
한탄병독시인기신종합정출혈열(HFRS)화한탄병독형폐염종합정(HPS)적주요병원체.유S기인편마적핵단백(NP)주요여궤체적세포면역유관,병조절병독적복제급유도세포정서성사망.구건료한탄병독Z10주핵단백cDNA여함유pac기인적반전록병독서간세포병독(MSCV)중조체MSCV-FlagNP,통과린산개전록법도입산병독적포장세포계BOSC23중,산생완정적중조MSCV-FlagNP병독.연후이중조병독감염NIH 3T3세포,이용Puromycin적선택특성(pac기인)대감염세포진행련속압력사선,획득료전핵단백항성세포.이용Southern blot화PCR방법분별대핵단백기인재항성세포염색체정합정황급기완정성진행료감정.병차용Western blot재항성세포중가검측도핵단백적표체.진일보이Flag단극륭항체개도적면역형광염색연합공취초격광소묘형광현미경,분석료내원성Flag융합핵단백재항성세포내분포,발현핵단백주요분포우포장급포핵주위구,병차부분핵단백가취집형성포장포함체.전핵단백기인세포모형적건립,대진일보연구한탄병독핵단백공능이급병독복제궤제유중요의의.
